牛甲狀腺和牛肉中5種硫脲嘧啶類藥物殘留量測定分析條件的選擇

時間：2023-03-24 21:25:21來源：food欄目：食品快速檢測閱讀：

牛甲狀腺和牛肉中5種硫脲嘧啶類藥物殘留量測定分析條件的選擇

[db:作者] / 2022-12-26 00:00

19.2.1.7 分析條件的選擇

(1) 初次凈化條件的選擇

5種硫脲嘧啶在衍生之前，需要進行凈化。如果凈化的效果不好，會直接影響衍生化效果。本方法對比了硅膠固相萃取柱(Bond Elut SI 500mg，3mL)和氨基固相萃取柱(NH2 500mg，3mL Waters)兩種萃取柱的凈化效果。試驗表明，氨基固相萃取柱凈化效果更好一些，因此選擇氨基固相萃取柱為凈化柱。

(2) 衍生化條件的選擇

對比了不同衍生劑用量對測定結果的影響。取一定濃度的5種硫脲嘧啶標準溶液，衍生劑加入量分別為0.25mg，0.5mg，0.75mg，1.0mg，1.5mg，2mg，進行衍生反應并進行測定，響應值和衍生劑用量的關系結果見表19-4。

表19-4 衍生劑用量對測定結果(響應信號峰面積)的影響

從表19-6中看出，當衍生劑加入量少于1.0mg時，可能使被測物衍生不完全，產生比較小的響應信號，本方法選擇衍生劑用量為1.5mg。

(3)提取穩定劑的選擇

本方法對比實驗了三種提取穩定劑及其組合對測定結果的影響，結果見表19-5。

表19-5 不同的提取穩定劑對測定結果(響應信號峰面積)的影響

從表19-7 中可看出，當提取溶液中加入巰基乙醇和EDTA-Na2溶液作為穩定劑時，五種硫脲嘧啶都有較好的回收率，并且對測定沒有干擾。

(4)二次凈化條件的選擇

一是衍生溶液調pH后用乙醚提取兩次，離心合并乙醚層氮氣吹干定容。這種方式操作步驟比較復雜，而且乙醚層不能全部移取，影響回收率。有時還會出現乙醚和水相分層不徹底的情況而產生干擾，從而影響結果的準確性。二是采用Oasis HLB (500mg，3mL Waters)固相萃取柱凈化，這種方法提取效率和凈化效果都較為理想，操作步驟也比較簡單，適合于大批量樣品的檢測。因此，選擇Oasis HLB(60mg，3mL Waters)萃取柱作為樣品凈化柱。表19-6是乙醚提取和固相萃取柱凈化兩種方法的凈化效果對比。

表19-6 乙醚和固相萃取凈化效果的對比(響應信號峰面積)

從表19-9中可以看出，用HLB固相萃取柱凈化能獲得比乙醚萃取更好得響應值。

(5)測定條件的選擇

1)液相色譜條件的選擇

本方法選取ZORBAX SB-C18(3.5um，150mm×2.1mm)，Atlantis-C18(3um，150mm×2.1mm)和Symmetry-C18(3um，150mm×2.1mm)三種液相分析柱進行實驗，三種柱子對五種硫脲嘧啶及內標的檢測靈敏度和分離效果進行比較，結果發現，Atlantis-C18分析柱，靈敏度和分離度都較理想。因此，選擇該柱為分析柱。

為了優化流動相，對比了甲醇+乙酸水溶液、乙腈+乙酸水溶液做流動相的色譜效果，實驗表明，0.1%甲酸乙腈溶液+0.1%甲酸水溶液作為流動相并采用梯度洗脫時，被測物分離度和靈敏度較高。

2) 質譜條件的選擇

取五種硫脲嘧啶和內標標準溶液20ug/mL，用NBF-CI衍生化，分別得到NBF-CI-TU，NBF-CI-MTU，NBF-CI-PRTU，NBF-CI-TAP，NBF-CI-MBI和NBF-CI-MEMBI標準衍生溶液。以5μL/min流速分別將凈化后的衍生物注入離子源。在正離子檢測方式下分別對其進行一級質譜分析(Q1掃描)得到分子離子峰。再對分子離子進行二級質譜分析(子離子掃描)，得到二級質譜圖。然后再對去簇電壓(DP)、聚焦電壓(FP)、碰撞氣能量(CE)及碰撞室出口電壓(CXP)等參數進行優化，使分子離子與特征碎片離子強度達到最大，確定最佳質譜參數。將液相色譜與質譜聯機，對霧化氣流量，霧化室溫度，噴霧針位置等參數進一步優化，使各種參數達到最佳。

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