咪唑駢噻唑類藥物測定方法（一）

時間：2023-03-24 22:18:44來源：food欄目：食品快速檢測閱讀：

咪唑駢噻唑類藥物測定方法（一）

[db:作者] / 2022-12-22 00:00

18.1.4.2 測定方法

目前有關動物源基質(zhì)中左旋咪唑的殘留檢測方法主要有快速檢測法和儀器檢測方法。快速檢測方法主要為生物傳感器法，儀器方法主要包括氣相色譜法(GC)、氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法(GC-MS)高效液相色譜法(HPLC)和液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法(LC-MS)等。

(1) 生物傳感器法(biosensor)

生物傳感器是以固定化的生物成分(如酶、蛋白質(zhì)、DNA、抗體、抗原)或生物體本身為敏感材料，與適當?shù)幕瘜W換能器相結合，用于快速檢測物理、化學、生物量的新型器件。與其他方法相比，其精密度高，可做到小型化、自動化、方便現(xiàn)場檢測。Crooks等報道了采用免疫生物傳感器測定牛肝臟和奶中左旋咪唑殘留的檢測方法。將左旋咪唑衍生為氨基左旋咪唑，并連接牛血清載體蛋白，制得純化抗原，并用其來制備兔多克隆抗體。將藥物衍生物固定在CM5傳感器芯片上，抗體可結合在傳感器芯片表面，從而得到檢測。反應物在芯片表面能夠穩(wěn)定再生幾百次，單個分析過程(包括加樣、芯片再生和系統(tǒng)清洗)只需要6min就能完成。樣品采用乙腈提取，肝臟樣品需要額外的過濾，采用Biacore生物傳感器檢測。肝臟組織的LOD為6.8μg/kg，牛奶為0.5μg/L；肝臟在100μg/kg添加水平的CV為6.7%，牛奶在2μg/L添加水平的CV為2.4%。McGarrity等開發(fā)了基于競爭性化學發(fā)光免疫分析的生物芯片陣列試劑盒用于左旋咪唑等20多種驅蟲藥物的篩選檢測。固體支持物和容器中的生物芯片包含的離散點的陣列，該法適用于半自動臺式分析儀。左旋咪唑的LOD為2μg/L(牛奶)、6.5μg/kg(組織)；方法回收率在71%～135%之間。

(2)電化學發(fā)光分析法(electrochemiluminescence)

電化學發(fā)光分析法具有靈敏度高、儀器設備簡單、操作方便、易于實現(xiàn)自動化等特點，廣泛地應用于生物、醫(yī)學、藥學、臨床、環(huán)境、食品、免疫和核酸雜交分析和工業(yè)分析等領域。Xiao等開發(fā)了血清中左旋咪唑的電化學發(fā)光檢測方法。該方法基于由Ru(bpy)3 2+引導的電化學發(fā)光信號增強，在12mmol/L的硼酸緩沖液(pH9)中，該離子在鉑電極.上與左旋咪唑的叔胺基團反應。發(fā)光強度和左旋咪唑的濃度在0～1×10-7 mol/L之間呈良好線性，方法LOD為1.76×10-11 mol/L。

(3)氣相色譜法(gas chromatography，GC)

GC具有操作簡單、分析速度快、高效能、高選擇性、高靈敏度、分析速度快和應用廣泛等優(yōu)點。目前國內(nèi)已有采用GC檢測動物組織中左旋咪唑殘留量的報道。

張叢蘭建立了豬、雞、羊可食用組織中左旋咪唑殘留的GC檢測方法。取勻質(zhì)樣品，KOH溶液堿化，乙酸乙酯提取，鹽酸溶液反萃取，KOH溶液中和酸，再用三氯甲烷萃取，取三氯甲烷層進：樣分析。采用HP-6890氣相色譜儀，氮磷檢測器(NPD)，HP-5毛細管柱(30m×0.32mm)分離，氮氣為載氣，流速2mL/min。結果顯示，在0.05～3.2μg/mL時，濃度與峰面積呈良好的線性關系，相關系數(shù)R為0.9996；各組織中左旋咪唑的LOD為5μg/kg；在添加濃度為5μg/kg、10μg/kg、20μg/kg時，各組織的回收率分別為：肌肉大于83.1%，肝臟大于81.4%，脂肪大于70.9%，腎臟大于81.8%；日內(nèi)、日間CV均小于12.5%。Casale等通過采用手性毛細管柱，開發(fā)了GC-火焰離子化檢測器(FID)測定尿中左旋咪唑/右旋咪唑對映體的方法。

(4)高效液相色譜法(high performance liquid chromatography，HPLC)

HPLC是獸藥殘留定量、定性分析的有效手段，具有檢測靈敏度高、選擇性好、定性定量同時進行、結果可靠等優(yōu)點。目前，動物源基質(zhì)中左旋咪唑殘留檢測方法報道最多的就是HPLC方法，常用的檢測：器有紫外檢測器(UVD)和二極管陣列檢測器( PDA/DAD)等。

曾勇等建立了豬、雞組織中左旋咪唑殘留的HPLC-UVD檢測方法。樣液經(jīng)混合型陽離子固相萃取小柱凈化后，采用Agilent TC-C18(5um，250mm×4.6mm i.d.)色譜柱分離，流動相由0.02mol/L磷酸二氫鈉-二乙胺緩沖液和乙腈按體積比7：3比例配制，HPLC在220nm波長處測定，外標法定量。左旋咪唑的保留時間為12～13min；在10～1000μg/L時，濃度與峰面積呈良好的線性關系，r為0.9999；在肌肉、脂肪和腎臟中的LOD為2μg/kg，LOQ為5ug/kg；在肝臟中LOD為2μg/kg，LOQ為10μg/kg；在不同添加濃度水平下，平均回收率在70%～110%之間，批內(nèi)CV在10%以內(nèi)，批間CV在15%以內(nèi)。Tyrpenou等建立了綿羊肌肉組織中左旋咪唑殘留的HPLC-PDA檢測方法。采用乙酸乙酯提取并LLP凈化，氫氧化鉀堿性溶液條件下再用氯仿二次提取。采用Zarbax SB-C18色譜柱

分離，柱溫50℃，流動相為體積分數(shù)0.1%的三氟乙酸(pH2.0)和乙腈-甲醇(3+2，v/v)按體積比30：70的比例配制而成，流速為1.0mL/min，檢測波長為220nm。在1/2倍、1倍、2倍和4倍MRL添加濃度的平均回收率為75.65%±2.74%，CV為10.4%；LOD和LOQ分別為2.0ug/kg和5.0μg/kg。

用該方法測定腎臟、肝臟和脂肪組織中左旋咪唑殘留，平均回收率分別為70.25%±1.07%、72.37%±3.6%和69.44%+2.22%，CV分別為1.52%、4.97%和3.19%。坂本美穗等也建立了畜產(chǎn)品中左旋咪唑殘留的HPLC檢測方法。用堿性乙酸乙酯提取牛、豬、禽的肌肉、肝、腎和脂肪組織中的左旋咪唑，并用0.1mol/L鹽酸溶液反萃取，提取液采用SCX柱凈化，HPLC檢測。色譜柱為ODS-80Ts(4.6mm×150mm，5um)，流動相為0.02mol/L KH2PO4-二乙胺(299+1，v/v，pH7.5)與乙腈按體積比7：3混合，流速1.0mL/min，柱溫40℃，PDA檢測波長220nm，進樣量20uL。該方法LOD為5μg/kg，平均回收率在78.3%～99.8%之間。

林維宣等建立了牛乳中左旋咪唑殘留量的HPLC測定方法。采用Spherisorh C18 色譜柱分離，流動相由甲醇、0.05mol/L磷酸緩沖液、二乙胺按體積比70：30：1比例配制而成，流速0.8mL/min，UVD在230nm處檢測，外標法定量。該方法LOD為10ug/kg；在添加10ug/kg、50μg/kg、2000μg/kg時，方法回收率為80.1%～84.2%，CV為7.2%～9.6%。De Ruyck等建立了牛奶中左旋咪唑等驅蟲藥殘留的HPLC檢測方法。采用離子對液相色譜，色譜柱為Alltimna C18(5um， 150mm×3.2 mm i.d.)，以0.01 mol/L 1-辛烷磺酸鈉離子對試劑(正磷酸調(diào)pH3.0)-甲醇-水為流動相，梯度洗脫，DAD檢測，左旋咪唑檢測波長為225nm。該方法平均回收率在68%～85%之間，左旋咪唑LOD為0.5μg/L，LOQ為1.4μg/L，CV為12.7%。

El-Kholy等建立了測定雞蛋和d血漿中左旋咪唑的HPLC-UVD檢測方法。以Luna8 C18(150mm×4.6mm i.d，5μm)作為色譜分離柱，2%乙酸水溶液-甲醇(50+50，v/v)作為流動相，同時加入低UV反應的庚烷磺酸鈉(Pic-B7)離子對化合物，并用氫氧化銨調(diào)節(jié)pH7.31，流速為1.0mL/min，波長225nm處檢測，以甲基左旋咪唑作為內(nèi)標定量。該方法的LOD均為1μg/kg(L)；血漿的LOQ為3ug/L，其他組織為25μg/kg。Chiadmi等報道了血漿中左旋咪唑的HPLC分析方法。采用C18色譜柱分離，磷酸鹽緩沖液-乙腈溶液等度洗脫，DAD在235nm測定。該方法在50～2000ng/mL范圍呈良好線性，LOQ為28ng/mL，日內(nèi)和日間CV均小于7%。

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