喹噁啉類藥物殘留分析技術——凈化方法（二）

時間：2023-03-25 00:05:00來源：food欄目：食品快速檢測閱讀：

喹噁啉類藥物殘留分析技術——凈化方法（二）

[db:作者] / 2022-12-21 00:00

2)固相萃取( solid phase extraction，SPE)

與LLP相比，SPE具有省時省力、經濟、節省溶劑、減少溶液乳化、可同時處理多個樣品并能自動化的優點，可有效除去樣品基質中的干擾物，對被分析物具有很高的濃縮因子，回收率也高。用于凈化本類藥物的SPE類型主要有MAX、SCX、HLB、C18等，因為待測物的酸性性質，采用MAX凈化的文獻較多。

A.MAX

Della等測定豬肝臟中QCA，采用酸性水解提取，提取液中QCA經萃取轉移至乙酸乙酯，再用0.1mol/L磷酸鹽緩沖液(pH7)反萃取，反萃取液過MAX SPE柱凈化，依次用0.05mol/L氫氧化鈉溶液、甲醇淋洗，用三氟乙酸-甲醇(2+98，v/v)洗脫，衍生化后用GC-MS測定。回收率為90%～102%，CV為1.7%～8.4%。Boison等測定豬肝中CBX代謝物BDCBX和QCA，采用蛋白酶酶解，酶解物加0.3mol/L鹽酸10mL酸化提取，提取液離心后上MAX小柱凈化，用30mL乙酸鈉-甲醇(95+5，v/v)淋洗，用4×3mL二氯甲烷洗脫BDCBX，再用3mL甲酸-乙酸乙酯(2+98，v/v)洗脫QCA，洗脫液吹干轉換溶劑后，進LC-MS/MS測定。BDCBX和QCA的LOQ為0.05μg/kg和0.5μg/kg，LOD為0.025ug/kg和0.3μg/kg，回收率在80%～120%之間。

Zhang等測定魚組織中OLQ代謝物MQCA，樣品經2mol/L的鹽酸水解后，水解提取液離心后過MAX SPE柱(依次用3 mL甲醇、3mL水活化)凈化，用3mL 0.05mol/L乙酸鈉-甲醇溶液(90+10，v/v)淋洗，吹干，用3mL含2%甲酸的乙酸乙酯洗脫，洗脫液氮氣吹干，流動相復溶后，LC-MS/MS測定。MQCA的LOD和LOQ分別為0.1ng/g和0.25ng/g，回收率為92.7%～104.3%，RSD小于6%。劉正才等測定魚、蝦、豬肉、雞肉、牛肉、豬肝中OLQ代謝殘留標識物MQCA，樣品酶解溶液加入0.3 mol/L HCI溶液提取，提取液用正己烷脫脂后，上MAX SPE柱凈化，依次用0.05mol/L乙酸鈉溶液(pH7.0)-甲醇(19+1，v/v)、水、水-甲醇(4+1，v/v)和甲醇淋洗，用含2%甲酸的乙酸乙酯洗脫，洗脫液吹干，流動相復溶后，LC-MS/MS測定。樣品中MQCA的LOQ為0.3～0.5ug/kg，平均回收率在60.7%～107%之間，RSD在4.59%～14.9%之間。余海霞等用堿液水解魚體內MQCA結合殘留物，水解液用酸中和后，上MAX柱凈化，待樣液全部流出后用含3 mL 0.05mol/L乙酸鈉的甲醇溶液淋洗，3mL含2%甲酸的乙酸乙酯溶液洗脫，洗脫液吹干，流動相溶解后，進HPLC測定。

方法回收率為80.5%～86.5%，RSD均小于6%，方法LOD為4.0μg/kg。

Wu等測定動物組織、魚肉中的QCA和MQCA，0.01mol/L磷酸鹽緩沖液(pH7.0)萃取液用MAX小柱凈化，依次用3mL 0.05mol/L氫氧化鈉溶液和3mL甲醇淋洗，用3mL甲酸-甲醇(2+98，v/v)洗脫，洗脫液轉換溶劑后用HPLC測定。QCA和MQCA的回收率在70%～110%之間，CV小于20%。實驗發現，如選用三氟乙酸-甲醇(2+98，v/v)作洗脫液，在色譜測定時會出現明顯的干擾峰，而用甲酸替換三氟乙酸，則千擾峰消失，可能是三氟乙酸具有強烈紫外吸收特性所致。林黎等測定牛奶和奶粉中CBX和OLQ代謝物殘留，酶解液用0.3mol/L HCI酸化，上清液直接上MAX小柱(分別用3 mL甲醇和3 mL水活化)凈化，分別用15mL 0.05mol/L乙酸鈉-甲醇(19+1，v/v)、5mL甲醇、3mL水、5mL 0.1mol/L鹽酸和3 mL水-甲醇(4+1，v/v)淋洗，抽干后再用2mL乙酸乙酯淋洗，最后用3 mL 2%甲酸-乙酸乙酯洗脫，洗脫液吹干復溶于1mL甲酸-甲醇(1+99，v/v)，用LC-MS/MS測定。牛奶中QCA和MQCA的LOQ為0.5 μg/kg，奶粉為4.0 ug/kg；平均回收率為68.2%～82.5%，CV為3.4%～12%。實驗對比了Bond Elute Certify和Oasis MAX兩種商用柱的凈化效果，后者的凈化效果和回收率明顯優于前者。

B.SCX

Hutchinson等測定豬肝中QCA殘留，用3mol/L氫氧化鈉溶液水解組織結合態QCA，水解液用4mL濃鹽酸中和，乙酸乙酯萃取，萃取液用0.1mol/L磷酸鈉溶液(pH8.0)反萃取，磷酸鈉溶液反萃取經鹽酸酸化后過SCX柱凈化，用15mL 0.1mol/L的鹽酸淋洗，用5mL 0.1mol/L的氫氧化鈉-甲醇(70+30，v/v)洗脫，洗脫液吹干用流動相復溶，LC-MS/MS測定。回收率為89%～11%，CV為0.15%～10%，CCa和CCβ分別為0.16mg/kg和0.27mg/kg。Hutchinson等測定豬肝中MQCA和QCA殘留，蛋白酶解液用濃鹽酸酸化提取，提取液用乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯萃取液再用0.1mol/L磷酸鈉緩沖液(pH8.0)反萃取，取4mL磷酸鈉緩沖液(pH8.0)萃取液，加入1mL濃鹽酸酸化后，上SCX小柱凈化，收集所有流出液，吹干，流動相復溶，LC-MS/MS測定。QCA的CCa和CCβ分別為0.4ug/kg和1.2ug/kg，MQCA的CCa和CCβ分別為0.7μg/kg和3.6ug/kg。

C.C18

梅景良等測定鯉魚、對蝦中OLQ及其代謝物MQCA，鹽酸水解液直接過C18 SPE柱凈化，依次用5mL甲醇和3mL 0.3mol/L HCI活化小柱，2mL超純水淋洗，再依次用3mL甲醇和1mL乙腈洗脫，洗脫液氮氣吹干后，用0.5mL水-0.5%甲酸水-乙腈-甲醇混合溶液(30+40+5+25，v/v)復溶，離心、過濾后進樣檢測。OLQ及MQCA的平均回收率分別為74.6%～80.9%和81.0%～86.6%，批內RSD為0.51%～4.47%，批間RSD為0.66%～7.58%；鯉魚組織中OLQ及MQCA的LOD分別為6μg/kg和10μg/kg，LOQ分別為20ug/kg和35μg/kg；對蝦組織中的LOD分別為4.5μg/kg和8 μg/kg，LOQ 分別為15 μg/kg和30 μg/kg。呂海鸞等采用0.2mol/L鹽酸提取水產品中MQCA，過C18 SPE柱，依次用2mL水和1 mL甲醇淋洗，吹干，再用3mL甲醇和1mL乙腈洗脫，35℃氮氣吹干，殘渣用0.5mL復溶溶液渦旋振蕩溶解1min，3900r/min離心15min，0.22μm濾膜過濾后，進行HPLC分析。豬肉、豬肝、豬腎、魚、對蝦和蟹中MQCA的LOD依次為0.90μg/kg、1.51μg/kg、0.94μg/kg、1.04μg/kg、1.62μg/kg和1.80μg/kg，LOQ依次為3.00μg/kg、5.02μg/kg、3.13μg/kg、3.46μg/kg、5.40μg/kg、6.00μg/kg；MQCA的平均回收率均在73.6%與89.0%之間，日內RSD在15%以下，日間RSD為20%以下。Li等測定豬肉和肌肉中MQX、QCT及其11種代謝物。乙腈-乙酸乙酯提取，酸化，再用乙酸乙酯萃取，過C18柱凈化后超高效液相色譜-串聯質譜(UPLC-MS/MS)測定。方法回收率在69.1%～113.3%之間，日內RSD小于14.7%，日間RSD小于19.2%，LOD在0.05～ 1.0μg/kg之間。

D.HLB

田強兵等建立了水產品中OLQ的測定方法。勻漿后的水產品試樣經甲醇溶液提取、正己烷除脂后，用HLB柱凈化。4mL甲醇和4mL水活化，10mL提取液上樣，依次用4mL 0.02mol/LHCl、0.1mol/L HCI和水淋洗，用3mL體積分數40%甲醇溶液洗脫，HPLC檢測。方法LOD和LOQ分別為0.02mg/kg和0.05mg/kg；回收率在78%-99.6%之間，RSD小于7.7%。Horie等用乙腈提取豬肌肉和肝臟中CBX及其代謝物QCA和BDCBX，提取液蒸干后用水復溶，過Oasis HLB柱(60mg)凈化，用8mL水洗滌，5mL甲醇洗脫，洗脫液吹干，流動相復溶后，LC-MS/MS測定。QCA和BDCBX的回收率在70.2%～86.3%之間，LOD為1ng/g。Merou等測定豬、牛肌肉和豬肝中QCA和MQCA，酶解上清液加1.5mL 1.2mol/L鹽酸酸化，過HLB柱凈化，用3mL水淋洗，5mL乙酸～甲醇(2+98，v/v)洗脫，洗脫液再經正相SPE柱凈化后，LC-MS/MS測定。CBX、MQCA、QCA的CCa和CCβ范圍分別為0.09～0.24μg/kg和0.12～0.41μg/kg，回收率為92%～101%(MQCA、QCA)和60%～62%(CBX)，CV小于12%。

E.其他

本類藥物極性相對中等或較高，采用正相SPE吸附劑凈化也有研究報道。Aerts等采用甲醇-乙腈提取豬腎臟和肝臟中CBX及其三個脫氧代謝物，豬肌肉、肝臟和腎臟用乙腈-甲醇(1+1，v/v)提取，提取液直接過氧化鋁-弗羅里硅土SPE柱(下層8g氧化鋁，上層2g弗羅里硅土)凈化，收集流出液，蒸干后用水復溶，用異辛烷LLP脫脂后，用HPLC測定。LOD為1～5μg/kg，平均回收率為81%～87%，CV為4%～10%。Merou等測定豬、牛肌肉和豬肝中QCA和MQCA，HLB柱的乙酸-甲醇(2+98，v/v)洗脫液再上氨基SPE柱凈化，先用5mL乙酸-甲醇(5+95，v/v)洗脫CBX，再用3.5mL氨水-甲醇(1+10，v/v)洗脫QCA和MQCA，合并所有洗脫液，吹干并復溶于80μL甲醇中，LC-MS/MS測定。CBX、MQCA和QCA的CCa和CCβ范圍分別為0.09～0.24μg/kg和0.12～0.41μg/kg，回收率為92%～101%(MQCA、QCA)和60%～62%(CBX)，CV小于12%。

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