鎮靜劑類藥殘留測定方法（五）

時間：2023-03-25 01:08:09來源：food欄目：食品快速檢測閱讀：

鎮靜劑類藥殘留測定方法（五）

[db:作者] / 2022-12-20 00:00

(6)酶聯免疫分析法(enzyme linked immunosorbent assays， ELISA)

免疫分析技術作為篩選方法具有前處理相對簡單，分析速度較快的特點，受到廣泛的關注，而ELISA技術是殘留分析中最為常用的免疫分析方法。

王自良選擇苯巴比安苯環對位作為偶聯位點，引入活性氨基作為間隔臂，經硝化和還原兩步化學反應合成半抗原-對氨基苯巴比妥，并用重氮化法偶聯于蛋白，合成免疫原，免疫新西蘭白兔獲得多克隆抗體。測試ELISA效價為1：6.4×105，阻斷ELISA測定的IC50為14.8μg/L，與巴比妥交叉反應率為5.2%。建立ELISA方法的靈敏度為0.88 μg/L， LOD為1.0 μg/L，檢測豬尿樣添加回收率為95.53%，平均批內和批間CV均小于15%；與其他化合物無交叉反應，不同生物基質對檢測結果影響不大。

李秋生用混合酸酐法與活化的牛血清白蛋白(BSA)偶聯，合成了免疫原和包被抗原。用免疫原免疫小鼠，制備了硝西泮的單克隆抗體，與結構類似物氯硝西泮、地西泮及其代謝物7-氨基硝西泮、7-氨基氯硝西泮都具有較高交叉反應，而與其他鎮靜劑交叉反應率很低。以此建立的間接ELISA方法，檢測尿液的回收率在62.8%～85.6%之間。王亞賓用地西泮與羥甲基羥胺偶聯作半抗原，采用混合酸酐法制得免疫原，并通過免疫獲得抗體。建立間接ELISA的IC50為0.145 ng/mL，在動物源食品中的LOD為0.1 ng/mL，與其他結構或功能相似的藥物交叉率很小，檢測食品中安定藥物的回收率為68%～92%，CV小于20%。

劉偉等采用混合酸酐法制備出氯丙嗪抗原，免疫小鼠，獲取的氯丙嗪單克隆抗體，建立間接競爭ELISA的IC50 為0.73 ng/mL。并以此建立了雞肝和豬肝中氯丙嗪的ELISA測定方法。方法回收率分別為88%～95%和86%～95%。劉建靜188合成了氯丙嗪人工免疫原，免疫后獲得兔抗氯丙嗪抗血清。以此建立ELISA方法檢測牛奶中氯丙嗪殘留，LOD為4.5 ng/mL，添加回收率在65%～114.6%之間。孫文佳等還將ELISA 法與化學發光法結合，建立了氯丙嗪的間接競爭化學發光酶免疫檢測方法，其IC50為0.12 μg/L， LOD為0.02 μg/L。

Cooper等制備了阿扎哌醇、丙酰丙嗪和卡拉洛爾的多克隆抗體。阿扎哌醇抗體與阿扎哌隆交叉反應率28%，丙酰丙嗪抗體與氯丙嗪、乙酰丙嗪交叉反應率為24.9%和11.7%。用三種抗體建立了同時測定動物腎臟中阿扎哌醇、阿扎哌隆、丙酰丙嗪、氯丙嗪、乙酰丙嗪和卡拉洛爾等6種藥物的ELISA檢測方法，LOD 分別為5μg/kg、15μg/kg、5μg/kg、 20 μg/kg、5 ug/kg、5 ug/kg。

(7)傳感器技術(sensor)

傳感器技術發展迅速，在鎮靜劑分析中，按照識別機制主要有分子印跡傳感器和免疫傳感器。

1)分子印跡傳感器

分子印跡傳感器將分子印跡的選擇性與傳感器的靈敏度結合起來，可以制成高選擇性、高靈敏度和長壽命的檢測工具。一般將MIP作為識別元件固定在傳感器界面，分析物與MIP的鍵合作用經傳感器轉化為電信號并放大，而得以檢測。劉曉芳等9在一次性絲網印刷電極上原位制備地西泮的分子印跡膜，與便攜式電導儀相連接，組裝成檢測地西泮的電導型傳感器，并測試了肉樣品中地西泮的含量。該傳感器對地西泮具有很高的靈敏度和特異性，LOD為0.008mg/L，線性范圍為0.039～1.25 mg/L，基于肉品的檢測回收率為91.3%～95.0%，可用于現場快速檢測。

2)免疫傳感器

免疫傳感器是將免疫測定法與傳感器技術相結合而構建的一類新型生物傳感器。將抗原或抗體固定在傳感器基體.上，通過傳感技術使抗原抗體反應時產生的物理、化學、電學或光學上的變化，轉變成可檢測的信號來測定待測分子的濃度。Salmain 等研制出免疫傳感器用于苯巴比妥殘留檢測，并與HPLC、ELISA 進行了對比。方法回收率為100%～110%，CV 為6%～10%，與HPLC結果相關性為0.95。與ELISA方法比較，樣品預處理更簡單，檢測結果更準確。

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