鎮靜劑類藥殘留測定方法（四）

時間：2023-03-25 01:09:42來源：food欄目：食品快速檢測閱讀：

鎮靜劑類藥殘留測定方法（四）

[db:作者] / 2022-12-20 00:00

(5)液相色譜-質譜法(liquid chromatography-mass spectrometry， LC-MS)

LC-MS方法靈敏度和特異性高，近來愈加受到關注。而超高效液相色譜(ultra performance liquid chromatography，UPLC)是近年來發展起來的，以提高色譜柱性能和儀器解析度為核心高速檢測系統，與質譜串聯，大大提高了檢測靈敏度。LC-MS檢測主要采用大氣壓化學電離源(APCI)和電噴霧電離源(ESI)。

1)巴比妥類

巴比妥類藥物呈酸性，高電場下容易失去質子帶負電荷，LC-MS測定時檢測負離子靈敏度遠遠大于正離子

SNT2217-2008采用反相C18色譜柱分離，乙腈-0.1%甲酸水為流動相，梯度洗脫，流速0.5mL/min，ESI負離子模式監測，串聯質譜在多反應監測(MRM)模式下檢測，外標法定量。各藥物的LOQ為1μg/kg，回收率為78.6%～110%。Wang等建立了動物組織中7種巴比妥類藥物殘留的UPLC-MS/MS測定方法。采用C18色譜柱，流動相為甲醇-0.01%乙酸，梯度洗脫，采用ESI負離子、MRM模式檢測。方法平均回收率在79.6%(巴比妥)-108%(司可巴比妥)之間，CV為3%～11%，LOD為0.25～0.5μg/kg，CCa為0.1～1μg/kg，CCβ為0.13～1.4μg/kg。

2)苯二氮卓類

錢曉東等建立了LC-MS/MS同時測定水產品中地西泮及其代謝物的殘留檢測方法。使用CAPCELL PAK C18(100mm×2.1mm i.d，3.5um)色譜柱分離，以甲醇和0.1%甲酸為流動相，梯度洗脫，流速0.2mL/min，串聯質譜采用ESI正離子掃描，MRM模式監測，內標法定量。實驗發現，采用甲醇-水體系時，目標化合物靈敏度高且噪聲小；在ESI模式下，加入揮發性酸，降低流動相的pH，有助于待測物的離子化；同時，在低流速下可產生較細的霧滴，有利于產生氣相離子，提高待測成分的信號強度。方法LOQ均為1μg/kg，平均回收率為82.1%～119.0%，RSD為2.2%～15.0%。Gunn等檢測血液和血清中阿普唑侖、羥基地西泮、奧西泮、去甲地西泮、氯硝西泮、勞拉西泮、地西泮、甲氨二氮卓、咪達唑侖、氟硝西泮、7-氨基氯硝西泮和7-氨基氟硝西泮等12種苯二氮卓類藥物殘留，用水-乙腈(80+20，v/v)提取后直接進樣，色譜柱為BEH C18 (50mm×2.1mm，1.7um)，流動相為甲醇-0.1%甲酸，梯度洗脫，流速0.4mL/min，串聯質譜在ESI正離子模式下，采用MRM模式檢測。方法LOQ為20 ng/mL，LOD為0.5～2ng/mL。Miyaguchi建立了毛發中13種鎮靜催眠藥的LC-Orbitrap-MS分析方法。5mg樣品用3.0mol/L磷酸銨溶液(pH8.4)進行微粉碎，用乙腈提取2次，蒸干有機層，再用50μL 10%乙腈(含0.1%甲酸)復溶，過濾，濾液進LC-Orbitrap-MS分析。采用多路選擇離子監測(multiplexed selected ion monitoring)模式，Q ExactiveTM的四極桿質量過濾器成功地消除了大量干擾，使得檢測分析物小峰成為可能。溴替唑侖、地西泮、去甲地西泮、艾司唑侖、氟硝西泮、硝西泮、三唑侖、雷美替胺和唑吡坦的LOQ為1.0 pg/mg，阿普唑侖、去甲氟地西泮、依替唑侖和佐匹克隆為4.0pg/mg；在100pg/mg和2.0ng/mg濃度水平下的準確度和精密度滿足FDA法規要求。

3)吩噻嗪類

李春風等建立了水產品中氯丙嗪、乙酰丙嗪、丙酰丙嗪、異丙嗪和甲苯噻嗪等5種吩噻嗪類藥物多殘留的LC-MS/MS確證方法。以YMC- PackPro C18色譜柱為分離柱，乙腈-50 mmol/L pH 4.5乙酸銨溶液為流動相，梯度洗脫，流速300 uL/min，柱溫30℃，在ESI正離子模式下進行測定。方法線性范圍為0.5～5.0 ng/g，總體平均回收率為75.7%～ 87.7%，RSD 為9.0%～15.2%。Zhang等應用UPLC-MS/MS建立了同時測定動物組織中11種吩噻嗪類鎮靜劑的多殘留檢測方法。采用BEH C18色譜柱分離，ESI正離子串聯質譜測定。豬肌肉、腎臟、肝臟中藥物回收率在76.4%～118.6%之間，CV為2.2%～ 19.9%，LOQ 為0.5～2.0 μg/kg。Zheng 等報道了LC-MS/MS同時測定肝臟、肉類、腎臟和脂肪中甲苯噻嗪和2，6-二甲基苯胺殘留量的方法。樣品用乙腈提取并用正己烷凈化，然后用C18反相色譜柱分離和API 5000正離子MRM模式的三重串聯四極桿質譜進行分析。甲苯噻嗪和2，6-二甲基苯胺的LOQ分別為0.2μg/kg、5ug/kg，平均回收率分別為63.5%和90.8%。

4)丁酰苯類

Fluchard等應用LC-MS/MS測定豬組織中阿扎哌隆和阿扎哌醇。采用Purospher model RPIs反相色譜柱，甲醇-0.1 mmol/L乙酸銨緩沖液為流動相，梯度洗脫，APCI源電離，串聯質譜測定。方法回收率為70%～106%，CV不超過16%。

5)多種類

Zhang等建立了兔血漿中奧氮平、氟哌啶醇、氯丙嗪、齊拉西酮和利培酮等藥物的LC-MSMS檢測方法。分析柱為Agilent Eclipse XDB C8 (150 mm×4.6mm，5um)，流動相為乙腈-30mmol/L醋酸銨(含0.05%三乙胺)，梯度洗脫，以丙咪嗪為內標，APCI正離子模式串聯質譜測定。方法LOD為2.0 μg/L；線性范圍為2.0～500.0 ug/L，相關系數為0.998；日內和日間CV均小于7.44%，回收率為70%～106%。Delahaut等建立了同時測定豬腎和肌肉中吩噻嗪類和丁酰苯類藥物的殘留分析方法。采用Purospher model RP18反相色譜柱分離，流動相采用乙腈-0.1 mol/L乙酸銨，APCI正離子離子源，MRM模式監測。肌肉中氯丙嗪、乙酰丙嗪、丙酰丙嗪的CCa為1.3μg/kg， CCβ為1.5～1.7μg/kg；腎臟中對應的LOD為肌肉中的2倍。

Zhang等同時測定了血液和尿液中巴比妥類、吩噻嗪類和苯二氮卓類藥物。采用AcquityUPLC BEH C18色譜柱，乙酸銨緩沖液-甲醇-乙腈為流動相，梯度洗脫，UPLC-MS/MS 在ESI正離子和負離子兩種模式下，MRM模式檢測。方法平均回收率為60.2%～125%；4個巴比妥類藥物的LOD為20～100 mg/L，吩噻嗪類和苯二氮卓類藥物的LOD為0.05～2.0mg/L。渠巖等測定了畜禽肉中13種鎮靜藥物(阿普唑侖、咪達唑侖、三唑侖、艾司唑侖、奧沙西泮、地西泮、硝西泮、氯硝西泮、卡馬西平、利多卡因、苯巴比妥、異戊巴比妥和司可巴比妥)殘留。采用Waters Aqutity BEH C18(2.1mm×50mm，1.7um)色譜柱，甲醇- 10 mmol/L乙酸銨溶液為流動相，梯度洗脫，流速0.4 mL/min，柱溫35℃，進樣量10μL， ESI 正離子離子源，MRM監測。13種鎮靜藥物在空白豬肉中的平均添加回收率為77.4%～100.2%，LOD為0.05～3μg/kg。孫雷等1建立了豬肉和豬腎中安眠酮、氯丙嗪、異丙嗪、地西泮、硝西泮、奧沙西泮、替馬西泮、咪達唑侖、三唑侖和唑吡旦等10種鎮靜劑類藥物殘留的UPLC-MS/MS分析方法。采用BEH C18色譜柱分離，0.1%甲酸乙腈溶液-0.1%甲酸溶液為流動相，梯度洗脫，ESI正離子模式電離，MRM模式檢測，基質匹配標準溶液法進行定量。10 種鎮靜劑在2～100 μg/L范圍內呈良好的線性關系，10種鎮靜劑的LOD為0.5μg/kg， LOQ為1μg/kg，回收率為64.5%～111.4%。GB/T 20763- 2006規定了豬組織中乙酰丙嗪、氯丙嗪、氟哌啶醇、丙酰二甲氨基丙吩噻嗪、甲苯噻嗪、阿扎哌隆、阿扎哌醇和咔唑心安殘留量的LC-MS/MS檢測方法。色譜柱為Inertsil ODS 3 (5um， 150mm×2.1mm)， 0.01 mol/L甲酸銨緩沖液(pH4)-乙腈-甲醇為流動相，梯度洗脫，柱溫35℃，流速200 uL/min，進樣量20μL， ESI 正離子模式下，MRM檢測。各藥物的LOD在0.1～0.5 μg/kg之間。

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