四環素類藥物殘留分析技術——測定薄層色譜法

時間：2023-03-25 01:46:58來源：food欄目：食品快速檢測閱讀：

四環素類藥物殘留分析技術——測定薄層色譜法

[db:作者] / 2022-12-19 00:00

(3)薄層色譜法(thin layer chromatography，TLC)

TLC是一種設備簡單、操作方便、分離速度快、靈敏度及分辨率較高的色譜分析方法。張啟華等報道了蜂蜜中TCs殘留量的薄層色譜測定法。殘留在蜂蜜中的TCs在經Sep-Pak C18小柱固相萃取處理后，用高效正相硅膠TLC分離，展開劑為：氯仿-乙酸乙酯-甲醇-乙腈-5.0mol/L氨水(3+1+3+0.5+1，v/v)，待展開距離達到75mm時取出。展開劑揮發后，先后噴上0.20mol/L的氯化鎂溶液和100g/L的三乙醇胺-乙醇溶液，晾干后用紫外燈在365nm下觀察熒光點。對陽性樣品利用薄層掃描儀在狹縫2×2、測定波長280nm、參比波長320nm的條件下進行反射吸收測定。根據標樣中DC、OTC、TC的Rf值與樣點中抗生素的Rf值來定性，利用外標法進行定量。在蜂蜜中的添加量為0.05ng、0.10ng、0.20ng時，DC、OTC和TC的回收率分別為91.6%～100.3%、84.5%～103.1%和77.0%～103.2%，DC、OTC、TC的LOD分別為：7.09ng、5.49ng和6.11ng。Weng等開發了采用TLC測定飼料中TC、CTC和OTC的方法。硅膠層先用10% Na-EDTA(pH8～9)噴涂，在二氯甲烷-甲醇-水中展開后，浸漬在液體石蠟-己烷(30+70，v/v)中，在熒光密度400nm下檢測。方法LOQ為TC和CTC雜質的0.2%，OTC雜質的0.1%。Meisen等報道了采用高效薄層色譜(HPTLC)-紫外光譜(UV)和紅外線基質輔助激光解吸/電離正交飛行時間質譜(IR-MALDI-o-TOF-MS)測定4種TCs的方法。分析物在正相硅膠和水可濕潤的混合C18反相層展開分離后，UV測定，分離的、明確標識的TCs譜帶再用MS分析。定量范圍在20ng～1ug之間，LOD為5ng。

(4)流動注射法(flow-injectionanalysis，FIA)

FIA是一種可擺脫溶液化學分析平衡理論的束縛，在非熱力平衡條件下對處于液流中能夠重現處理樣品和試劑帶區的定量流動分析技術，具有精度高、分析速度快以及易于實現自動化等特點。

王皓等采用FIA-化學發光法(chemiluminescence，CL)法測定血樣和尿樣中的DC。在0.8mol/L的HNO3酸性介質中，DC與0.5mmol/L的Ce(IV)反應，產生化學發光，采用10umol/L的羅丹明6G增敏，蠕動泵的轉速為30r/min，利用FIA技術建立了簡易、快速測定DC的化學發光法。化學發光強度在1.0×10-8～1.0×10-6 g/mL范圍內與DC的濃度呈現良好的線性關系；LOD為2×10-9 g/mL；測定血樣和尿樣中的DC回收率為97%～117.4%，CV低于4.5%。Rodriguez等采用FIA-分光光度法檢測牛奶中CTC、TC和OTC殘留。牛奶樣品直接經MSPE凈化，酸化甲醇洗脫，FIA分離，紫外可見分光光度計在540nm處檢測。該方法的線性范圍為0.03～0.60mg/L，LOD為10μg/L，平均回收率為91.0%～97.0%，CV低于5%。經MSPE-HPLC和SPE-HPLC方法驗證，差異不顯著。

(5)毛細管電泳法(capillary electrophoresis，CE)

CE具有操作簡單、色譜柱不受樣品污染、分析速度快、分離效率高、樣品用量少、運行成本低等優點。

陳天豹等用CE對蜂蜜中的TC、OTC、DC和CTC進行了分離測定。毛細管為50umi.d.×57cm(有效長度50cm)，毛細管在每次使用前先用0.1mol/L的NaOH在高壓(138kPa)下清洗5min，后用水洗5min，再用電泳緩沖液洗2min。TCs的等電點(pI)在4～6，在pH2～8范圍內較穩定。磷酸氫二鈉-檸檬酸的pH緩沖范圍為2.6～7.6，且磷酸鹽和檸檬酸在短波長下光吸收低，不會增加基線噪音，降低了可檢測濃度，隨pH的降低，毛細管表面的負電荷減少，電滲流減弱，實驗結果顯示出峰時間相應延長，pH3.2時分離效果較佳。電泳緩沖液中添加一種或幾種有機試劑，對樣品的溶解性、電滲流大小和分辨率等都有較大的影響。TCs在磷酸氫二鈉_檸檬酸電泳緩沖液中溶解性較差，因此需在電泳緩沖液中添加一定量的乙腈以解決溶解性差的問題，方法采用的緩沖液為0.02mol/L磷酸氫二鈉-0.01mol/L檸檬酸緩沖液(pH3.2，含體積分數為12%的乙腈)。蜂蜜樣品經水稀釋后1000r/min離心5min，CE-UVD檢測，檢測波長為270nm。TC、OTC和DC的LOD為20ug/L，CTC為40μg/L，回收率大于89.6%，CV為0.5%～3.4%。Casado-Terrones等用毛細管區帶電泳(CZE)分離檢測蜂蜜中的8種TCs以150mmol/L硼酸鈉(pH9.8)-2.5%異丙醇作背景緩沖溶液，目標抗生素在16min內全部出峰，LOD為23.9～49.3mg/kg，蜂蜜的加標回收率為55%～89%。

Kowalski采用帶有泡狀檢測池的CE在6min內對魚肉樣品中的TC、OTC和DC進行了檢測。

方法使用石英毛細管柱(57cm×75umi.d.)，3.45kPa壓力進樣5s，分離電壓為20kV，分離溫度為22℃，UVD在270～280nm檢測。TC、OTC和DC的回收率分別為84.0%、80.6%和89.2%，CV低于6.2%，LOD為1.3～1.8ng/g，LOQ為4.3～5.9ng/g。Miranda等開發了測定雞肉中TC、OTC和DC的CZE-UVD分析方法。樣品經C18 SPE和AmberliteXAD7離子交換樹脂凈化后，進CE分析。

分離緩沖液含有30mmol/L磷酸鈉、2mmol/L Na2EDTA和2.5% 2-丙醇(pH12)，分離電壓14kV，動態注入5s，360nm測定。整個分析時間小于12min。方法回收率為85%～95%，RSD小于5%；C18 SPE凈化方法的LOD為61～68μgkg，AmberliteXAD7凈化方法的LOD為81～89μg/kg。

Nozal等報道了采用CE測定水樣中TC、OTC和DC的方法。樣品采用STRATA-X小柱富集凈化，經流歧管與CE在線分析。方法分析范圍在7～45g/L之間，LOD為2g/L；回收率為9%～106%，RSD小于7.5%。

Mu等建立了牛奶中TC、OTC和DC殘留的CE分析法。樣品經MSPD凈化，CE分析，電泳緩沖液為30mmol/L Na2HPO4和1mmol/LEDTA-Mellvaine緩沖液(pH11.5)，石英毛細管柱(50cm×75um i.d，有效長度40.5cm)分離，30mbar壓力進樣3s，分離電壓為25kV，分離溫度為25℃，UVD在268nm檢測。方法的平均回收率為93.4%～102%，LOD為0.0745～0.0808μg/mL。Santos等報道了采用CE分析牛奶中TC等抗生素的殘留分析方法。樣品經沉淀蛋白后，用C18SPE柱凈化，CE測定。毛細管柱為熔融硅膠柱(58.5cm×75umi.d.)，分離緩沖液為2.7×10-2 mol/L KH2PO4和4.3×10-2 mol/L Na2B4O7緩沖液(pH8)，分離電壓為18kV，0.5psi靜態注入3s，分離溫度為25℃，UVD在210nm測定。在添加濃度2.5～5μg/mL，回收率超過72%，RSD小于5%。Wang等以場強樣品堆積-電遷移注射在線富集，毛細管電泳-質譜聯用(CE-MS)檢測牛奶中的TCs。35mmol/L三羥甲基氨基甲烷-1.1%甲酸-5%甲醇-15%乙腈作為分離緩沖溶液，方法LOD為7.14～14.90ng/mL。研究表明，與未在線富集方法相比，場放大進樣檢測靈敏度提高6～7倍；將毛細管檢測部分折成“Z”字形，加熱吹成泡狀是增加檢測靈敏度的有效措施。

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