非甾類同化激素類藥殘留分析前處理方法——凈化（二）

時間：2023-03-25 04:05:31來源：food欄目：食品快速檢測閱讀：

非甾類同化激素類藥殘留分析前處理方法——凈化（二）

[db:作者] / 2022-12-13 00:00

3)分子印跡技術(molecularimprintingtechnology，MIT)

MIT是指為獲得在空間結構和結合位點上與模板分子相匹配的聚合物制備技術，是一門源于高分子化學、生物化學、材料化學等的交叉學科。MIT就是仿照抗原-抗體的形成機理，在印跡分子(imprintedmolecule)周圍形成高交聯的剛性高分子，除去印跡分子后在聚合物的網絡結構中留下具有結合能力的反應基團，對模板分子表現出高度的選擇識別能力。

馬金余等以DES為模板分子，a-甲基丙烯酸為功能單體，二甲基丙烯酸乙二醇酯為交聯劑，合成了DES分子印跡聚合物(MIP)。所得白色塊狀聚合物經研碎、過篩、用丙酮沉降聚合物顆粒，除去過細粉末，得到粒徑為35～45μm之間的聚合物顆粒。以該MIP為填料制成SPE小柱，應用于DES殘留分析的樣品前處理，并比較了該MIP柱與傳統C18柱對DES保留行為的差異。結果表明，該MIP柱對DES有較好的富集分離效果，對加標雞肉樣進行了含量測定，回收率為98.7%～99.6%，CV小于1.3%，且該小柱活化后能重復使用。Jiang等采用表面MIT技術合成了--種簡單的氨基功能化硅膠印跡材料，用于SPE凈化處理DES。與非印跡聚合顆粒相比，制備的DES-MIP吸附劑具有良好的吸附容量、顯著的選擇性、可結合性和快速結合動力學特征。最大靜態吸附容量為62.58mg/g，在50mg/L水平的相對選擇性因子值為61.7，吸附劑平衡在10min內完成。該MIP-SPE用于魚肉中DES的測定，回收率超過87.5%，RSD小于11.6%。劉瑛等應用MIT技術，以鄰苯二胺為功能單體、DES為模板，采用循環伏安法在玻碳電極表面合成了性能穩定的DES-MIP膜，并用50%乙醇溶液迅速去除模板，得到對DES響應的MIP電化學傳感器。研究了此MIP傳感器的分析性能，建立了以K3Fe(CN)6為電子傳遞媒介的間接分析法。在1.0×10-7～5.1×10-6 mol/L范圍內，DES的濃度與K3Fe(CN)6的相對峰電流變化呈線性關系。選擇性實驗表明，此傳感器對結構相似的分子有較強的抗干擾能力。

4)免疫親和色譜(immunoffinity chromatography，IAC)

IAC以抗原抗體的特異性、可逆性免疫結合反應為基礎，當含有待測組分的樣品通過IAC柱時，固定抗體選擇性地結合待測物，其他不被識別的樣品雜質則不受阻礙地流出IAC柱，經洗滌除去雜質后將抗原-抗體復合物解離，待測物被洗脫，樣品得到凈化。其優點在于對目標化合物的高效、高選擇性保留能力，特別適用于復雜樣品痕量組分的凈化與富集。

張琴等以DES為半抗原制備單克隆抗體，該抗體對DES、HES和DIS的交叉反應率分別為100%、11.36%和299.54%，IC50分別為42.54ng/mL、38.20ng/mL和14.20ng/mL。選用固定抗體的濃度約為5mg/mL凝膠與溴化氰活化的瓊脂糖4B偶聯，偶聯率在71.64%～90%之間，制備IAC柱的動態柱容量和絕對柱容量分別為446.47～645.50ng/mL凝膠和90.47～141.10ng/mL抗體。雞肉樣品經乙醚提取，IAC凈化，80%甲醇洗脫后，儀器測定。HPLC檢測方法的LOD為22.2ng/g，回收率為63.7%～67.6%；GC-MS檢測方法的LOD為0.33ng/g，回收率為54.1%～67.3%。

Zhang等采用IAC技術凈化牛肌肉中的ZER、TAL、ZAN和a-ZOL。采用ZER的單克隆抗體與溴化氰活化的瓊脂糖4B偶聯(偶聯率為96.3%)，制備了IAC柱，ZER、TAL、ZAN和a-ZOL的動態柱容量分別為2639.7ng/mL、2840.3ng/mL、2731.5ng/mL、2736.3ng/mL溶膠，絕對柱容量分別為406.1ng/mg、437.0ng/mg、420.2ng/mg、421.0ng/mg MAb。選擇甲醇-水(30+70，v/v)為洗滌劑，甲醇為洗脫劑。20天內重復使用15次后，動態柱容量下降至1236.4ng/mL、1330.0ng/mL、1175.8ng/mL、1243.5ng/mL溶膠，仍能滿足殘留檢測的需要。牛肉經勻質后，甲醇提取，冷凍去脂，提取液過IAC柱，然后用磷酸緩沖液、水及甲醇-水(30+70，v/v)洗滌IAC柱，甲醇洗脫，N2吹干，衍生化后，用GC-MS檢測。該方法LOD為0.5μg/kg，在1.0-5.0μg/kg添加范圍內，回收率為79.6%～110.7%，CV為3.2%～11.4%。王清等建立了動物源性食品中6種玉米赤霉醇類化合物殘留量的復合免疫親和柱凈化、LC-MS/MS分析方法。魚肉、肝臟、牛奶、蜂蜜經β-葡萄糖苷酸/硫酯酸復合酶酶解后用乙醚提取，提取液經氮氣吹干，殘渣用50%乙腈溶液復溶后過濾，濾液用PBS溶液稀釋，經復合IAC柱富集凈化后供LC-MS/MS檢測。該方法LOD在0.04～0.10μg/kg之間，平均回收率為70.9%～95.6%，RSD為2.0%～11.8%。王昕等建立了IAC-HPLC法檢測牛奶中6種玉米赤霉醇及類似物的方法。樣品經IAC柱凈化后，用HPLC檢測。結果表明，該方法LOD均為0.05μg/L，平均回收率在54.22%～90.76%之間，CV小于9.44%。

5)固相微萃取(solid phase micro extraction，SPME)

SPME是利用待測物在基體和萃取相間的非均相平衡，使待測組分擴散吸附到石英纖維表面的固定相涂層，待吸附平衡后，再與GC或HPLC聯用，分離和測定待測組分。該技術不需要使用柱填充物和有機溶劑進行洗脫，集萃取、富集和解析于一體。

鄧愛妮等建立了SPME-HPLC法測定雞肉組織和奶粉中的DES。分別考察了聚二甲基硅氧烷(PDMS，100μum)和聚丙烯酸酯(PA，85μm)兩種萃取頭纖維涂層對DES的萃取效果。結果表明，PA涂層萃取纖維頭對DES萃取效果顯著高于PDMS涂層萃取纖維頭。由于DES的雙酚結構，使其極性得到增強，而具有非極性的PDMS涂層萃取頭主要用于非極性化合物的萃取。因此，選用適合于萃取極性化合物的PA(85um)涂層萃取頭；選擇30min作為最佳萃取時間；解吸時間確定為10min；在萃取溶液中不加鹽；解析液為甲醇-水(70+30，v/v)，萃取液pH5.93～6.20，攪拌速度600r/min。操作步驟為:取1.0g絞碎的雞肉試樣或3.0g奶粉試樣，加少量甲醇，振蕩并離心，取出，上清液，0.45um濾膜過濾，放入磁力攪拌子，推動SPME裝置的手柄，將萃取頭(首次使用前用甲醇活化20min，室溫條件下風干)浸入待測溶液內，以600r/min的速度進行攪拌萃取。萃取完成后，將萃取頭轉移到裝有40μL流動相的自制解吸裝置中靜態解吸，然后將解吸液直接在230nm進行HPLC分析。該方法LOD為0.006μg/mL，測定結果的CV小于5%，應用于雞肉組織和奶粉中DES檢測，三個加標水平的回收率為81.9%～93.1%。Yang等報道了采用碳納米管增強的中空纖維SPME(CNTs-HF-SPME)處理乳制品中DES的HPLC分析方法。中空纖維的壁孔用多壁碳納米管(MWCNTs)填充，DES被MWCNTs選擇性吸附，甲醇解吸后，HPLC測定。作者對影響CNTs-HF-SPME效果的因素，如中空纖維的長度、萃取和解吸時間、萃取溫度、攪拌速度、樣品溶液的pH值、有機溶劑和鹽的量等，進行優化。在優化條件下，該方法LOD為5.1μg/L，回收率良好。

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