非甾類同化激素類藥殘留分析前處理方法——提取

時間：2023-03-25 04:10:36來源：food欄目：食品快速檢測閱讀：

非甾類同化激素類藥殘留分析前處理方法——提取

[db:作者] / 2022-12-13 00:00

(2)提取方法

非甾類同化激素殘留分析主要采用液液萃取(LLE)的方法提取。近年來，一些新的提取技術，如超聲波輔助提取(UAE)、加速溶劑萃取(ASE)等也開始應用到非甾類同化激素殘留的提取中。

1)液液萃取(liquid liquid extraction，LLE)

A.二苯乙烯類

二苯乙烯類化合物在弱極性和中等極性的有機溶劑中有較好的溶解性，常用的有機溶劑有甲醇、乙醚、叔丁基甲基醚、乙酸乙酯、三氯甲烷和乙腈等。

Yang等用甲醇提取豬肉、牛肉、蝦、牛奶和肝臟的水解液，經固相萃取柱凈化后，LC-MSMS檢測。DIS、HES和DES的LOQ為0.04～2.0μg/kg，平均回收率為76.9%～121.3%，CV為2.4%～21.2%。應永飛等建立了動物組織中DIS、HES和DES殘留量的檢測方法。試樣中的藥物經甲醇超聲提取后，過HLB固相萃取柱凈化、氮吹至干，用流動相溶解后進行LC-MS/MS測定，以D8-DES為內標進行定量分析。方法LOD為0.2μg/kg，LOQ均為0.5μg/kg；加標濃度在0.5～10μg/kg范圍內，動物組織中DIS、HES和DES的回收率為78.8%～110.9%，批內RSD小于或等于8.0%。許泓等利用叔丁基甲基醚提取動物源性食品中DES、HES和DIS殘留，經硅膠固相萃取柱凈化后，LC-MS/MS測定。方法對DES、DIS的LOD為0.05ng/g，在0.5～10ng/g范圍內回收率為84%～108%；對HES的LOD為0.025ng/g，在0.25～5ng/g范圍內回收率為59%～87%。Reuvers等先用叔丁基甲醚提取組織樣品中的DES殘留，再用1mol/L氫氧化鈉提取，經C18固相萃取柱凈化后，HPLC檢測。該方法LOD為0.5～2.0μg/kg，回收率為66%。

張琴等用乙醚提取雞肉樣品中的DES，經IAC凈化后，儀器檢測。高效液相色譜(HPLC)檢測方法的LOD為22.2ng/g，回收率為63.7%～67.6%；氣相色譜-質譜(GC-MS)檢測方法的LOD為0.33ng/g，回收率為54.1%～67.3%。vanPeteghem等用乙醚提取肉水解液中的DES殘留，過固相萃取柱凈化后，放射免疫(RIA)測定。LOD達0.07ng/g，回收率為64%～115%。

Li等用乙腈-丙酮溶液(4+1，v/v)提取雞和蝦組織中的DES，三氯甲烷脫脂，ELISA檢測。該方法的LOD為600pg/mL，回收率大于79.5%，日內、日間CV低于6%。

尹怡等用乙酸乙酯超聲提取水產品中的DES，過弗羅里硅土(Florisil)小柱進行凈化，GC-MS測定。方法回收率大于80%，LOD為0.5μg/kg。吳銀良等用10%碳酸鈉溶液和乙酸乙酯提取動物組織中DES、DIS和HES，硅膠固相萃取柱凈化，GC-MS分析。方法的LOD為0.30μg/kg (DES)、0.10μg/kg(HES)和0.15μg/kg(DIS)；在0.5～4.0μg/kg添加水平，回收率為73.0%～86.5%，RSD為1.0%～7.2%。

Coffin等利用DES溶解于堿性溶液的性質，用NaOH溶液和三氯甲烷反復萃取動物組織中的DES殘留，衍生化后，氣相色譜(GC)檢測。其LOD可達2～10μg/L，回收率為70%～110%。Tirpenou等用苯和NaOH溶液提取樣品中的DES，經硅膠柱凈化后GC檢測，方法回收率達到81%。

B.RALs

RALs屬于二羥基苯甲酸內酯類化合物，其苯環上都有2個羥基，呈弱酸性，具有高度相似的化學結構和性質，文獻報道的提取溶劑有乙醚、叔丁基甲基醚、乙腈和甲醇等。

彭濤等對乙醚、丙酮、正已烷和乙酸乙酯對RALs的提取效率進行了比較研究，結果顯示乙醚的提取效率最高。動物肝臟中RALs在酸性環境中經β-葡萄糖苷酸/硫酸酯復合酶水解后，加入無水乙醚，振蕩提取，經HLB固相萃取柱凈化后，LC-MS/MS檢測。在添加濃度1～4μg/kg范圍內，方法回收率在70%～90%之間，RSD小于20%。6種RALs的CCa在0.17～0.31μg/kg之間，CCβ在0.26～0.42μg/kg之間。曹瑩等用乙醚提取雞肝酶解液，經液液分配凈化后，用LC-MS分析ZER殘留。方法的LOQ為4ng/g，回收率為65.0%～86.4%，CV為5.1%～15.4%。方曉明等用乙醚提取雞肝β-葡糖苷酸酶酶解液，氫氧化鈉抽提，C18小柱凈化后，用HPLC檢測。樣品的加標平均回收率為72.0%～80.4%，RSD為8.3%～13.9%，LOQ為5μg/kg。Shin等用叔丁基甲基醚提取老鼠血清中的ZON，經液液分配凈化后，HPLC分析。方法回收率為79.3%～96.2%，日內和日間CV低于12.1%，LOQ為10ng/mL。

Xia等采用乙腈提取牛奶中的ZER、TAL、ZAN、ZON、a-ZOL和β-ZOL，過MAX柱凈化后，LC-MS/MS分析。方法平均回收率為92.6%～112.5%，CV低于11.4%，LOD和LOQ分別為0.01～0.05μg/L和0.05～0.2μg/L。張清杰等用乙腈提取牛奶和奶粉中的6種玉米赤霉醇及其類似物，經免疫親和柱凈化后，用HPLC檢測。方法添加回收率均為80%～110%，CV均小于12%。錢卓真等利用乙腈提取水產品中的ZER、TAL、ZAN、ZON、a-ZOL和β-ZOL，乙腈飽和正己烷脫脂，氨基固相萃取柱凈化后，LC-MSMS分析。方法LOQ為1.0μg/kg，回收率為75.9%～103.8%，RSD為3.90%～13.5%。Zhang等采用甲醇提取牛肌肉中的ZER、TAL、ZAN和a-ZOL，經免疫親和柱(IAC)凈化，衍生化后，用GC-MS檢測。該方法LOD為0.5μg/kg，在1.0～5.0μg/kg添加范圍內，回收率為79.6%～110.7%，CV為3.2%～11.4%。

C.二苯乙烯類和RALs同時提取

Kathrin等利用乙醚同時提取牛尿液中二苯乙烯類化合物(DES、DIS、HES)和RALs(ZER、TAL、a-ZOL、β-ZOL和ZON)。5mL尿液樣品中加入2mL乙酸鈉緩沖液(2mol/L，pH5.2)，加入100μL蝸牛液(Helix pomatia juice)，37℃避光放置16h或50℃放置3h，水解完成后，用氫氧化鈉溶液(2molL)調pH9.0±0.1，5mL乙醚提取2次，旋轉蒸干，加入1.5mL甲醇和3mL水，2mL正已烷洗滌2次，棄掉正己烷層，固相萃取柱凈化，LC-MS/MS分析。方法檢測二苯乙烯類化合物和RALs的LOD分別低于1μg/L和1.5μg/L，回收率分別為99.2%～106.0%和99.4%～107.9%。

2)加速溶劑萃取(accelerated solvent extraction，ASE)

ASE是指在提高的溫度(50～200℃)和壓力(1000～3000psi或10.3～20.6MPa)下用溶劑萃取固體或半固體樣品的新穎樣品前處理方法。與傳統提取方式相比，ASE速度快、溶劑用量少、萃取效率高、待測組分回收率好，可實現全自動安全操作。在非甾類同化激素殘留分析的前處理也有文獻報道。

Gadzala-Kopciuch等建立了ASE提取組織中的ZON及其代謝產物a-ZOL。使用雞肌肉和肝臟組織進行添加回收試驗，對甲醇-水、乙腈-水，以及它們的不同比例混合進行比較。結果發現，乙腈-水(84+16，v/v)回收率最高(ZON和a-ZOL的回收率分別為95.4%和97.9%)，共萃取雜質少；正己烷脫脂會影響回收率；純溶劑(甲醇、乙腈、三氯甲烷等)提取的回收率較差。ASE的最佳條件為：壓力1500psi，溫度200℃，靜態萃取時間5min，靜態循環5次，沖洗溶劑體積為池容積的75%(約11mL)。該方法檢測ZON和a-ZOL的LOD分別為8.10ng/g和14.02ng/g，LOQ分別為24.30ng/g和42.06ng/g。

3)超聲輔助萃取(ultrasound-assisted extraction，UAE)

UAE是利用超聲波輻射壓強產生的強烈機械振動、擾動效應、乳化、擴散、擊碎和攪拌等多級效應，增大物質分子運動頻率和速度，增加溶劑穿透力，從而加速目標成分進入溶劑，促進提取的進行。優點是萃取速度快，價格低廉、效率高。有文獻報道采用UAE技術來提高非甾類同化激素的萃取效率。

Zhang等以甲醇為提取溶劑，常溫超聲30min，提取肉中的DES，再在堿性條件下(pH10.3)用氯仿分三次萃取，化學發光方法檢測。方法的回收率為93.1%～104.5%，CV低于3.0%，LOD為0.75～1.12pg/mL。應永飛等以甲醇為提取溶劑，在60℃下超聲5min，提取動物組織中的DIS、DES、HES等二苯乙烯類藥物，LC-MS/MS測定。方法的LOD為0.2μg/kg，LOQ為0.5μg/kg；在0.5～10μg/kg添加濃度范圍內，回收率為78.8%～10.9%，批內RSD小于等于8.0%。周建科等采用UAE方法提取中老年奶粉中的DES。奶粉樣品中加入石油醚，超聲萃取5min，離心，棄去石油醚，再加入乙腈，超聲萃取5min，離心，取下層乙腈，氮氣濃縮并定容至0.2mL，進HPLC測定。DES的LOD為0.025mg/L，RSD在1.55%～3.46%之間，平均回收率在85.0%以上。

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