液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定動(dòng)物源食品中硝基呋喃類代謝物殘留量

時(shí)間：2023-03-25 04:34:01來(lái)源：food欄目：食品快速檢測(cè) 閱讀：

液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定動(dòng)物源食品中硝基呋喃類代謝物殘留量

[db:作者] / 2022-12-13 00:00

7.2.1.1 適用范圍

本方法適用于豬肉、牛肉、雞肉、豬肝、水產(chǎn)品(魚類、蝦蟹類和貝類)、牛奶、奶粉和蜂蜜中呋喃它酮代謝物(5-嗎啉甲基-3-氨基-2-惡唑烷基酮，AMOZ)、呋喃西林代謝物(氨基脲，SEM)、呋喃妥因代謝物(1-氨基-2-內(nèi)酰脲，AHD)和呋喃唑酮代謝物(3-氨基-2-惡唑烷基酮，AOZ)殘留量液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測(cè)定。方法檢出限：豬肉、牛肉、雞肉、豬肝、水產(chǎn)品(魚類、蝦蟹類和貝類)中AMOZ、SEM、AHD和AOZ的檢出限均為0.5μg/kg；牛奶中AMOZ、SEM、AHD和AOZ的檢出限均為0.2μg/kg；奶粉中AMOZ、SEM、AHD和AOZ的檢出限均為1.6μg/kg。蜂蜜中AMOZ和AOZ的檢出限為0.2μg/kg；SEM和AHD的檢出限為0.5ug/kg。

7.2.1.2 方法原理

豬肉、牛肉、雞肉、豬肝、水產(chǎn)品(魚類、蝦蟹類和貝類)試樣中殘留的硝基呋喃類代謝物在酸性條件下用2-硝基苯甲醛衍生化，用OasisHLB或性能相當(dāng)?shù)墓滔噍腿≈鶅艋ｋ妵婌F離子化，液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜檢測(cè)。用外標(biāo)法或同位素標(biāo)記的內(nèi)標(biāo)法定量。

牛奶或奶粉試樣用三氯乙酸水解并脫蛋白，硝基呋喃類代謝物在酸性條件下用2-硝基苯甲醛衍生化，用OasisHLB或性能相當(dāng)?shù)墓滔噍腿≈鶅艋Ｒ合嗌V-串聯(lián)質(zhì)譜儀(ESI+)檢測(cè)。用內(nèi)標(biāo)法或外標(biāo)法定量。

蜂蜜試樣中殘留的硝基呋喃類抗生素代謝物在酸性條件下用2-硝基苯甲醛衍生化，用OasisHLB或相當(dāng)?shù)墓滔噍腿≈鶅艋ｋ妵婌F離子化，液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜檢測(cè)，外標(biāo)法定量。

7.2.1.3 試劑和材料

甲醇、乙腈、乙酸乙酯：色譜純。磷酸氫二鉀(K2HPO4)、乙酸、二甲亞砜、鹽酸、氫氧化鈉：優(yōu)級(jí)純。2-硝基苯甲醛(C7H5NO3，2-NBA)：優(yōu)級(jí)純，含量≥99%。

磷酸氫二鉀溶液：0.1mol/L。稱取17.4g磷酸氫二鉀，用水溶解，定容至1000mL。

鹽酸：0.2mol/L。量取17mL濃鹽酸用水定容至1000mL。

氫氧化鈉溶液：1mol/L。稱取40g氫氧化鈉，用水溶解，定容至1000mL。

衍生劑：含2-硝基苯甲醛0.05mol/L。稱取0.075g 2-硝基苯甲醛溶于10mL二甲亞砜，現(xiàn)用現(xiàn)配。

樣品定容溶液：10mL乙腈，0.3mL乙酸，用水稀釋到100mL。

四種硝基呋喃代謝物標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)：純度均≥99%。

四種硝基呋喃代謝物內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)：5-嗎啉甲基-3-氨基2-懸唑烷基酮的內(nèi)標(biāo)物，Ds-AMOZ；氨基脲的內(nèi)標(biāo)物，13C15N-SEM；1-氨基-2-內(nèi)酰脲的內(nèi)標(biāo)物，13C3-AHD；3-氨基-2-惡唑烷基酮的內(nèi)標(biāo)物，D4-AOZ。四種內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的純度均≥99%。

四種硝基呋喃代謝物標(biāo)準(zhǔn)貯備溶液：1.0mg/mL。稱取適量的四種硝基呋喃代謝物標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，分別用甲醇稀釋成1.0mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)貯備液。避光保存于-18℃冰柜中，可使用6個(gè)月。

四種硝基呋喃代謝物混合標(biāo)準(zhǔn)溶液：0.1μg/mL。吸取適量四種硝基呋喃代謝物的標(biāo)準(zhǔn)貯備溶液，用甲醇稀釋成0.1μg/mL的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，避光保存于-18℃冰柜中，可使用3個(gè)月。

四種硝基呋喃代謝物內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)貯備溶液：1.0mg/mL。稱取適量的四種硝基呋喃代謝物內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，分別用甲醇配成1.0mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)貯備液。避光保存于-18℃冰柜中，可使用6個(gè)月。

四種硝基呋喃代謝物內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)溶液：0.1μg/mL移取適量的四種硝基呋喃代謝物內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)貯備溶液，用甲醇稀釋成0.1ug/mL的混合內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)溶液，避光保存于-18℃冰柜中，可使用3個(gè)月。

OasisHLB固相萃取柱：60mg，3mL。使用前分別用5mL甲醇和10mL水預(yù)處理，保持柱體濕潤(rùn)。

5-甲基嗎啉-3-氨基2-唑烷基酮、氨基脲、1-氨基-2-內(nèi)酰脲和3-氨基-2-唑烷基酮混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液：1.0ug/mL。吸取適量四種硝基呋喃代謝物的標(biāo)準(zhǔn)貯備溶液，用甲醇配成1.0μg/mL的混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，標(biāo)準(zhǔn)工作溶液避光貯存在-18℃冰柜中，保存期為3個(gè)月，使用前回溫到室溫。

5-甲基嗎啉-3-氨基-2-唑烷基酮、氨基脲、1-氨基-2-內(nèi)酰脲和3-氨基-2-唑烷基酮混合基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)校準(zhǔn)溶液：稱取7個(gè)蜂蜜空白樣品(稱樣量為4g)于50mL棕色離心管中，其中6個(gè)空白樣品中分別加入適量四種硝基呋喃代謝物的混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，按照樣品操作步驟同步操作。使最終樣液中5-甲基嗎啉-3-氨基-2-唑烷基酮和3-氨基-2-唑烷基酮的濃度均分別為0ng/mL，0.5ng/mL，1.0ng/mL，2.0ng/mL，5.0ng/mL，10.0ng/mL，20.0ng/mL；氨基脲、1-氨基-2-內(nèi)酰脲的濃度均分別為0ng/mL，1.0ng/mL，2.0ng/mL，5.0ng/mL，10.0ng/mL，20.0ng/mL，50.0ng/mL作為基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)校準(zhǔn)溶液，該基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)校準(zhǔn)溶液即配即用。

7.2.1.4 儀器和設(shè)備

液相色譜-串聯(lián)四極桿質(zhì)譜儀，配有電噴霧離子源。分析天平：感量0.1mg和0.01g各一臺(tái)。液體混勻器。固相萃取裝置。氮?dú)獯蹈蓛x。恒溫振蕩水浴。真空泵：真空度應(yīng)達(dá)到80kPa。微量注射器：25μL，100μL。棕色具塞離心管：25mL，50mL。pH計(jì)：測(cè)量精度±0.02pH單位。儲(chǔ)液器：50mL。離心機(jī)：轉(zhuǎn)速4000r/min以上。

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