磺胺類藥物殘留分析技術（三）

時間：2023-03-25 08:06:23來源：food欄目：食品快速檢測閱讀：

磺胺類藥物殘留分析技術（三）

[db:作者] / 2022-12-08 00:00

(2)凈化方法

SAs常用的凈化方法主要有液液分配法(LLP)、固相萃取法(SPE)、QuEChERS、分子印跡技術(MIP)、免疫親和色譜法(IAC)及在線自動凈化法等。

1)液液分配(liquid liquid partition，LLP)

LLP通過分析物在互不相溶的兩相中的溶解度和分配系數的不同，達到將分析物和雜質分離的目的。LLP時容易產生乳化現象，在提取時應當注意振蕩速度，按“緩-快-緩”進行操作，同時，在LLP時常加入無水硫酸鈉以提高回收率，并減少雜質的浸出。Potter等建立了一種快速分析魚組織中17種Sas和2種磺胺增效劑的LC-MS/MS方法。分析物用乙腈-水(50+50，v/v)提取，離心，先加入正己烷LLP凈化除脂，再加入氯仿LLP提取凈化，蒸干，復溶后進樣檢測。該方法LOD在0.1～0.9ng/g之間，回收率在30%～100%之間，RSD在4%～23%之間。徐維海等建立了HPLC法同時分離并檢測魚、蝦等水產品中14種SAs。樣品經無水硫酸鈉脫水后，乙腈提取藥物，再用乙腈飽和正己烷LLP脫脂凈化，HPLC檢測。該方法的LOD為0.01～0.02mg/kg，樣品的加標回收率為66%～92%。Stoev等建立了肉和腎臟中10種常用SAs的HPLC-FLD定量分析方法。先用乙酸乙酯提取，用丙酮再提取一次，蒸干后，用水-二氯甲烷LLP凈化3次，有機相蒸干復溶后，進HPLC測定。在1μg/kg、5ug/kg、10ug/kg添加濃度，方法平均回收率分別為64%、68%和75%，LOQ為0.5～1μg/kg。

2)固相萃取(solid phase extraction，SPE)

SPE利用吸附劑將液體樣品中的目標化合物吸附，使其與樣品基體、干擾物質分離，然后通過洗脫液洗脫或加熱解吸附，分離和富集目標物。與傳統的LLP相比，SPE不需要大量有機溶劑，不產生乳化現象，可凈化很小體積的樣品，是目前獸藥殘留分析中樣品前處理的主流技術。動物源食品中SAs凈化可以用的SPE填料類型較多，包括正相柱(硅膠柱、硅藻土柱、堿性氧化鋁柱)、反相柱(C18柱、HLB柱)和離子交換柱(陽離子交換柱、陰離子交換柱)，另外，還可聯合用柱。

A.硅膠柱

Alaburda等引建立了牛奶中STZ、SMZ和SDM的殘留檢測方法。采用二氯甲烷提取，硅膠固相苯取柱凈化，提取物經熒光胺衍生化后，用反相HPLC-FLD檢測。方法LOD為0.3μg/L，STZ和SMZ的LOQ為1μgL，SDM為2.5μg/L，變異系數(CV)為4.4%～6.6%，STZ、SMZ和SDM的平均回收率分別為63.2%、91.2%和63.2%。Shao等測定豬肉、豬肝、豬腎中17種SAs時用無水硫酸鈉除水，乙腈提取，正己烷除脂，提取液蒸干后，氯仿-正己烷(1+9，v/v)復溶，Sep-Pak硅膠柱(正己烷活化)凈化，依次用甲醇-丙酮(1+1，v/v)和丙酮洗脫分析物，LC-MS/MS檢測。方法回收率在52%～120%之間，LOD在0.01～1.0ug/kg之間。董丹等采用類似技術建立了雞肉中17種SAs殘留量的LC-MS/MS測定方法。樣品經過勻漿、乙腈提取、正己烷脫脂、硅膠SPE柱凈化后進行LC-MS/MS分析。以穩定同位素C-磺胺二甲基嘧啶作為內標，采用多反應監測(MRM)定量。方法LOD為0.02～1ug/kg，17種SAs的加標回收率為52.3%～124.9%，RSD為1.0%～17.6%。

B.堿性氧化鋁柱

李俊鎖等建立了雞肝組織中中7種SAs的HPLC方法。樣品加入無水硫酸鈉后用乙腈提取，正己烷LLP脫脂和堿性氧化鋁SPE柱凈化，乙腈-水(75+25，v/v)洗脫，HPLC測定。在0.05～0.5mg/kg添加濃度范圍內，該方法回收率在68.8%～100.0%之間，CV在1.3%～12%之間：LOD為0.01～0.03mg/kg，LOQ低于0.05mg/kg。我國農業部標準《動物源食品中磺胺類藥物殘留的檢測方法-高效液相色譜法》中組織樣品經乙腈提取，正已烷LLP分配，提取液濃縮至近干，用3mL乙腈。水(95+5，v/v)溶解殘留物，再過堿性氧化鋁SPE柱，吹干，用5mL乙腈-水(75+25，v/v)洗脫，用0.017mol/L磷酸定容至10mL，過0.45um微孔濾膜后，進HPLC測定。該方法在雞肌肉和肝臟組織中的LOD為10～20ug/kg，回收率在80.9%～100.4%之間，室內CV為10.2%，室間CV為18.5%。

C.弗羅里硅土柱

Granja等建立了蜂蜜中ST、SM2和SDM的殘留分析方法。蜂蜜樣品采用30% NaCl溶解，再用二氯甲烷LLE提取，用弗羅里硅土SPE柱凈化，HPLC檢測，磺胺吡啶作為內標定量。ST、SM2和SDM的LOD分別為3ug/kg、4ug/kg、5ug/kg；在100ug/kg添加水平，ST、SM2和SDM的平均回收率分別為61.0%、94.5%和86.0%。

D. C18柱

de la Cruz等采用LC-MS/MS檢測雞蛋中的SDM、SMZ、SQXNa、SAM、SCP、SMR、SMTZ、SMXZ、STZ和SMPD等10種SAs。以SDZ為內標，乙腈提取后旋蒸至1mL，再用乙腈和水預處理的C18 SPE柱凈化，乙洗脫，蒸干復溶后，用LC-MS/MS測定。該方法回收率為87%～116%，RSD為8.5%～27.2%；CCa在101.0～122.1ng/g之間，CCp在114.5～138.8ng/g之間。Heller等的同時建立雞蛋中15種SAs的HPLC-UVD和LC-離子阱質譜(MSn)分析方法。樣品用乙腈提取，經C18 SPE柱凈化后，用HPLC和LC-MS2測定。該方法的確證濃度可以達到5～10ng/g，HPLC的定量范圍在50～200ppb之間。Krivohlavek等建立了一種快速分析蜂蜜中11種SAs的殘留檢測方法。蜂蜜樣品經勻漿提取，用C18 SPE柱凈化后，采用LC-MS測定，方法LOD可達到25ug/kg。Zou 等建立了豬肉、豬肝、雞肉、牛肉中12種SAs的HPLC方法。組織樣品用乙腈提取，經9-芴基甲基氯甲酸酯(FMOC-Cl)衍生化后，過C18 SPE柱凈化，HPLC紫外檢測器(UVD)測定。方法添加回收率在70%以上，RSD低于13.7%，LOD在3～5ug/kg之間。

E.HLB柱

郭根和等采用HLB柱凈化了對蝦樣品中的5種SAs。樣品用二氯甲烷提取，氮氣吹干后用3mL磷酸鹽緩沖液-乙腈(95+5，v/v)復溶，過HLB柱凈化，5mL甲醇洗脫，HPLC-UVD檢測。方法LOD達到2ug/kg，相關系數在0.9997以上：在100ugkg、50ug/kg、10μg/kg三個添加水平，方法回收率在71%～90%之間，RSD<10%。Li等開發了蝦中18種獸藥(包括SQX等SAs)的LC-MSn分析方法。均質后的樣品用5%三氯乙酸提取，提取液用HLBSPE柱凈化，LC-MSn測定，SAs的確證濃度在10～20ng/g之間。Vargas Mamani等建立了牛奶中SM2、SQX和SMZ的殘留分析方法。樣品經蛋白沉降后，用HLBSPE柱凈化，采用HPLC-DAD測定，方法LOQ均低于藥物的MRL。

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