β-受體激動劑殘留測定方法（一）

時間：2023-03-25 08:20:13來源：food欄目：食品快速檢測閱讀：

β-受體激動劑殘留測定方法（一）

[db:作者] / 2022-12-08 00:00

1.1.4.2測定方法

目前國內外用于檢測動物源產品中β-受體激動劑的方法和手段逐漸增多，主要有感官識別、光譜分析、色譜分析、免疫分析和生物傳感器技術等。

(1)感官識別法

可以從動物服體的顏色和品質上來判斷。含有β-受體激動劑(特別是克倫特羅)的肉色較深，較鮮艷，脂肪層非常薄，在腹股溝的脂肪層內毛細血管分布較密，甚至呈充血狀態。內臟實質器官(心、肝、腎)充血腫脹，用手指觸之酥軟呈脂肪變性；間質器官如肺、氣管切面見泡沫、氣腫等病變特征，有時有少量“汗水”滲出肉面。而健康肉呈淡紅色，肉質彈性好，也不會有“出汗”現象。感官檢驗法可用于對含有β-受體激動劑動物源產品的粗略判斷，主觀性較強，可為消費者購買放心肉提供一定的參考。

(2)光譜分析技術(spectroscopy)

由于克倫特羅等β-受體激動劑溶于水和乙醇，可直接用水進行提取，而且克倫特羅等既可顯芳香第一胺類的鑒別反應，也可顯氯化物的鑒別反應。因此，采用分光光度計檢測，可在243nm與296nm的波長處得到最大吸收峰。分光光度法在常溫下有較好的穩定性。由于β-受體激動劑在生物樣品中含量甚微，該方法檢測限過高，達不到殘留分析要求，目前只限于藥品本身的常規分析。

(3)免疫分析技術(immunoassay)

免疫分析技術主要應用于動物源產品中β-受體激動劑殘留樣品的篩選，具有靈敏度和特異性高、快速簡便，且一次能檢測大量樣品的特點。但在某些反應中有交叉反應，存在假陽性結果，以及對未知化合物不能測定，因此在實際應用中受到一定限制。

1)酶聯免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)

ELISA的基本原理基于抗原抗體反應進行的測定。目前，國內外已研制出用于克倫特羅、沙丁胺醇、萊克多巴胺等β-受體激動劑殘留檢測的商品化ELISA試劑盒。該方法樣品前處理簡單，批量檢測成本低，適合對活體動物做大批量樣品的快速檢測。歐盟等國家已將此作為“篩選法”，用于宰前尿檢、血檢及屠宰場的檢疫。缺點是該法結果假陽性率較高，疑似陽性的樣本需要用儀器方法確證。Sawaya等采用ELISA法從羊尿和羊眼組織樣品中篩查殘留克倫特羅的陽性樣品。在尿樣中最低檢測限為0.272ng/g，在眼組織樣中最低檢測限為1.54ng/g。經GC-MS確證，所有篩選出的“陽性”樣品均為陰性。但該方法具有很大的實用價值，縮短了大量樣品的篩查時間，并避免了假陰性的發生。Pleadin等采用ELISA作為定量篩選方法測定豬組織中萊克多巴胺濃度。給豬連續口服飼喂萊克多巴胺28天，停藥的1、3和8天后屠宰，測定腎臟、肝臟、肌肉、腦和心臟組織中萊克多巴胺的殘留量。該方法的平均回收率在70%～90%之間，RSD小于13%。

2)膠體金免疫層析法(colloidal gold immunochromatographic assay，GICA)

GICA的基本原理是利用微孔濾膜的滲濾濃縮和毛細管作用，使抗原抗體反應在固相膜上快速進行，然后用膠體金標記的抗體來進行直接顯色。由于膠體金肉眼可見，故陰性反應者在膜上呈現紅色斑點，陽性反應則不會形成紅色斑點。張敏娟等1分別用GICA法和ELISA法對豬尿樣品進行檢測，兩種方法陽性吻合率為85.71%，當生豬尿樣中克倫特羅的濃度大于2700ppt時，吻合率達91.67%。該法儀器設備簡單，試劑安全，對操作者沒有太高的專業技術要求，能實現現場檢測；缺點是反應線顏色受反應時間影響較大。

3)放射免疫分析法(radioimmunoassay，RIA)

RIA法是利用同位素標記的抗原與未標記的抗原同抗體發生競爭性抑制反應的放射性同位素體外微量分析方法。目前國外已有運用RIA測定克倫特羅的試劑盒產品。該法具有特異性強、靈敏度高、操作簡便、準確快速、易標準化等優點，但是由于所用儀器較昂貴，對條件要求較苛刻，并且放射性同位素對操作人員有一定的傷害，從而限制了廣泛應用。Horne等采用RIA技術測定牛肝中克倫特羅的殘留量，結合MSPD提取凈化技術，使傳統操作過程得到簡化。該方法回收率在86%～96%之間。

4)熒光免疫分析法(fluoroimmunoassay，FIA)

FIA是利用三價稀土離子及其熬合物等熒光物質作為示蹤物，代替同位素、酶和化學發光物質，標記抗原、抗體、核酸探針等物質的一種免疫分析方法。當免疫反應發生后，根據熒光強度和相對熒光強度比值，判斷反應體系中分析物的濃度，從而達到定量分析的目的。時瑾等采用時間分辨熒光免疫技術(TRFIA)，建立了豬尿中克倫特羅的間接競爭免疫分析方法。以克倫特羅-BSA為免疫原，制備抗體；克倫特羅與卵清蛋白(OVA)的聯結物包被96孔板為固相抗原，與游離克倫特羅共同競爭有限的抗體，用稀土離子Eu3+標記的羊抗兔抗體進行示蹤。該方法的靈敏度為0.01μg/L，測量范圍為0.01～25μg/L，平均回收率為99.7%，RSD為3.9%；與鹽酸異丙腎上腺素的交叉反應率為0.01%，與沙丁胺醇、鹽酸腎上腺素、重酒石酸去甲腎上腺素無交又反應。8條不同時間進行的克倫特羅-TRFIA的效應點值ED80、ED50、ED20分別為(0.07±0.01)ug/L、(1.47±0.11)ug/L和(23.6±0.56)ugL。尿樣經TRFIA和ELISA試劑盒同時檢測克倫特羅，兩者的相關系數為0.932，結果相符。該法具有靈敏度高、操作簡便、示蹤物穩定、定量分析量程寬、無放射性污染和應用范圍廣等優點，在疾病診斷、療效觀察等醫學研究領域應用較多，但由于對溫度的強烈依賴性和熒光強度取決于激發波長，因此在藥物殘留分析方面應用較少。

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