苯并咪唑類藥物測定——氣相色譜法

時間：2023-03-24 22:39:03來源：food欄目：食品快速檢測閱讀：

苯并咪唑類藥物測定——氣相色譜法

[db:作者] / 2022-12-22 00:00

(5)氣相色譜法(gas chromatography，GC)

GC是一種以氣體做流動相的柱色譜分離分析方法，具有分離效率高、靈敏度高、分析速度快及應用范圍廣等特點。隨著科學技術的不斷進步，研究者陸續開發了--些高選擇性、高特異性的檢測器；同時，快速GC和全二維GC等分離技術也相繼出現，使得氣相色譜技術得到了不斷發展與完善。由于BMZs極性較高，揮發性較低，且熱穩定性較差，BMZs一般都需要經衍生化后再測定。

Marti等中建立了GC方法測定動物組織中ABZ、FBZ、FLU、MBZ、OFZ、OXI、TBZ和TCB等8種BMZs殘留。用乙腈提取肌肉組織中的藥物，正己烷脫脂，分別用C18 SPE柱和硅藻土柱凈化樣品，洗脫液蒸干后，置于40℃裝有五氧化二磷的真空器中干燥8h，殘渣用2mL丙酮復溶，過膜，加入30μL 30%(m/v) 碳酸鈉和50μL 10%(v/v)碘甲烷丙酮溶液，渦動混勻，密封，置于60℃石蠟浴器中衍生化30min，冷卻后，混合物用氮氣吹干，殘渣加1mL乙酸乙酯和1mL水，渦動混勻，取出乙酸乙酯，再用1mL乙酸乙酯萃取2次，混合乙酸乙酯提取液，氮氣吹干至0.1mL，再用硫酸鈉脫水后，進GC分析。氣相色譜條件：色譜柱為OV-1-CB石英玻璃毛細管柱(10m×0.25mm，膜厚0.25um)，載氣為氦氣，升溫程序：60℃持續0.5min，以30℃/min從60℃升至150℃，再以6℃/min速度從150℃升至300℃，進樣口溫度270℃，檢測器溫度350℃，不分流，進樣量1uL。甲基化衍生物分別用氮磷檢測器(NPD)和電子捕獲檢測器(ECD)測定，研究發現，NPD較ECD測定的雜質干擾少；采用ECD只能檢測到TBZ衍生物，而NPD可檢測所有BMZs衍生物。該方法的LOD在20～50μg/kg之間。

(6)氣相色譜-質譜法(gas chromatography -mass spectrometry，GC-MS)

GC-MS將GC的高分離效率、高靈敏度與MS的高選擇性集為一體，通過分析質譜圖和氣相保留值，能對多組分混合物進行定性鑒定和分子結構的準確判斷；并通過峰匹配法、總離子流質量色譜法、選擇離子檢測法，對待測物進行定量分析。GC-MS已經成為痕量物質分析的重要手段之一，廣泛地應用于食品分析、石油化工、醫藥衛生等許多領域。GC-MS分析BMZs一般要經甲硅烷基化、甲基化、芐基化等衍生作用后再測定。

Wilson等采用GC-MS確證了肝臟和肌肉組織中的TBZ、TBZ-5-OH、ABZ-NH2-SO2、FBZ、CAM、MBZ和OFZ等BMZs殘留。組織提取物采用兩步法衍生化：首先用2mol/L HCl在110℃反應1h，將氨基甲酸酯水解為氨基；水解產物再與N-甲基-(叔丁基二甲基硅烷基)三氟乙酰銨(MTBSTFA)反應，使一級和二級胺硅烷化，而TBZ-5-OH的苯酚功能團轉化成甲硅烷基。GC采用Hewlett-Packard(12m×0.20mm，0.33μm膜厚度)氣相色譜柱，進樣口溫度260℃，起始柱溫為150℃，保持2min，然后以6℃/min的速度升溫至300℃，平衡0.5min，清除時間1.5min，質譜參數為接口溫度300℃，駐留時間100ms，采用電子電離(EI)，SIM方式監測。在100μg/kg的添加水平下，肝臟組織平均回收率為92%，CV為8%，肌肉組織平均回收率為88%，CV為5%。該方法不適用于CAM，因為當注入三乙基氫氧化銨甲醇后，該藥物會在進樣口(260℃)快速烷化。Markus等建立了肝臟中ABZ的GC-MS測定方法。將0.4mL肝臟提取樣品，于35℃±5℃蒸干，加入50uLMTBSTFA，渦動混勻，于100℃±4℃衍生化，每半小時取出渦動混勻一次，2h衍生完全后，用GC-MS分析。進樣口溫度260℃，升溫程序：起始溫度200℃，最終溫度300℃，升溫速度20℃/min，不分流，通風口流速100mL/min，載氣為氦氣，30～40psi，進樣體積1.0～3.0μL，EI離子源溫度140℃，分離器和傳輸線275℃±5℃，倍增器電壓2000～2400eV，電子能量70eV，SIM模式監測。ABZ的LOD和LOQ分別為25μg/kg和50μg/kg。

Marti等建立了確證動物組織中8種BMZs殘留的GC-MS方法。用乙腈提取肌肉組織中的藥物，凈化后，置于40℃裝有五氧化二磷的真空器中干燥8h，殘渣用2mL丙酮復溶，過膜，加入30uL 30%(m/v)碳酸鈉和50μL 1%(v/v)五氟芐基溴(PFB-Br)溶液，渦動混勻，密封，置于60℃石蠟浴器中衍生化30min，冷卻后，混合物用氮氣吹干，殘渣加1mL乙酸乙酯和1mL水，渦動混勻，取出乙酸乙酯，再用1mL乙酸乙酯萃取2次，混合乙酸乙酯提取液，氮氣吹干至0.1mL，再用硫酸鈉脫水后，進GC-MS分析。氣相色譜柱為DB-1石英玻璃毛細管柱(30m×0.25mm，膜厚0.25um)，載氣為氦氣，升溫程序：60℃持續0.5min，以30℃/min從60℃升至150℃，再以6℃/min速度從150℃升至300℃，進樣口溫度270℃，接口爐溫為300℃，進樣體積1uL，直接接口，離子化電壓為70eV，源溫度250℃，質量范圍為50～750amu/s，EI和正離子化學電離源(PCI)電離。該研究評估了用氨基功能團衍生化的范圍，發現用PFB-Br酰化和碘甲烷甲基化均能獲得較滿意的結果，而甲基化產物用EI和PCI電離測定時能提供對定量有用的結構信息，但在進樣和分析過程中由于高溫易降解，使得定量很困難。

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