硝基呋喃類代謝物最大允許殘留分析技術——測定方法（一）

時間：2023-03-25 05:42:14來源：food欄目：食品快速檢測閱讀：

硝基呋喃類代謝物最大允許殘留分析技術——測定方法（一）

[db:作者] / 2022-12-12 00:00

7.1.4.2 測定方法

在已經發表有關NFs殘留檢測方法的文獻中，早期的報道大多數是檢測原藥。然而，由于NFs對光敏感，且具有代謝快速的特點，在動物體內的半衰期不過數小時，在動物組織中通常不太可能檢出原藥殘留。因此，殘留檢測的標識物已經變為它們的代謝產物。目前，國內外報道的NFs代謝物殘留檢測方法主要有酶聯免疫法(ELISA)、液相色譜法(LC)和液相色譜-質譜聯用法(LC-MS)等。

(1)高效液相色譜法(high performance liquid chromatography，HPLC)

采用液相色譜檢測NFs代謝物的報道很少，這是因為常規LC測定技術難以滿足檢測可食性組織中NFs代謝物的靈敏度要求，不過仍然可以用于方法學研究等。

Arancibia等建立了尿液中呋喃妥因及其代謝物的HPLC-UV檢測方法。該方法使用SFE萃取尿液中呋喃妥因及其代謝物，以LC-18-DB(250mm×4.6mm，5um)為LC分析柱，流動相為乙腈-水(85+15，v/v)，流速為0.2mL/min，檢測波長為310nm。呋喃妥因的保留時間為13.38min，其代謝物為10.20min；呋喃妥因的線性范圍為10.9～378.0umol/L(R=0.9995)，其代謝物為3.0×10-3～21.0umol/L(R=0.9992)；檢測限分別為12.1μmol/L和0.9umol/L。Chumanee等建立了蝦肉中4種NFs代謝物殘留的HPLC-DAD檢測方法。20g蝦肉樣品在0.2mol/LHCl的酸性條件下，加入20mmol/L的NTA、0.12g NaOAc、1g KCl，37℃避光過夜反應。衍生化之后用乙酸乙酯提取，最后用正己烷LLP除脂。NTA衍生化的代謝物在ChromSpher 5 C18柱(250mm×4.6mm，5μm)上分離，乙腈-5mmol/L酸銨(pH7.5)作為流動相，流速為1mL/min，整個梯度洗脫程序時間為40min，洗脫順序為：NTAHD<NTSEM<NTAOZ-<NTAMOZ，NTAHD的檢測波長為310nm，其余為308nm。在1ug/kg、1.5μg/kg、2ug/kg三個濃度水平進行添加回收實驗，回收率均高于86%，CV小于14%。AHD、AOZ、SEM、AMOZ的LOQ分別為0.7803μg/kg、0.7973μg/kg、0.6973ug/kg、0.9118μg/kg，LOD均在0.2ug/kg左右。該方法單純應用LC技術，LOQ就能夠達到1μg/kg以下，為NFs代謝物的檢測提供了更多的選擇。

(2)膠束動電毛細管色譜法(micellar electrokinetic capillary chromatography，MEKC)

Wickramanayake等首次建立了NFs及其代謝物(NFM)的膠束動電毛細管色譜測定方法。選用脫氧膽酸鈉(SDC)作為形成膠束的表面活性劑，采取中央組合實驗設計(CCD)的方法優化分離條件，對緩沖液中硼酸鹽與磷酸的濃度比、運行電解質的pH、電壓等實驗參數進行優化。表面活性劑濃度對分辨率的影響是非常顯著的。在優化條件下(80mmol/LSDC，pH9.0，20mmol/L硼酸鹽+20mmol/L磷酸，16kV)，8對連續峰的分辨率在1.9～11.8之間。由于代謝物缺乏具備UV活性的發色團，采用2-NBA進行衍生化。為了模仿同時分析樣品中NFs和衍生化NFM的提取程序，含水樣品(用2-NBA預衍生)用C18 SPE柱富集。SPE柱經水洗滌后，用弱洗脫特性的小體積有機溶劑(正已烷)去除過量的2-NBA，分析物用乙腈洗脫。采用開發的方法，所有分析物遷移時間[t(mig)]的重現性都非常好，絕對t(mig)的RSD小于1%，t(mig)比率的RSD小于0.2%，峰面積比率的RSD為4%。所有化合物的LOD(S/N=3)在0.19～2.0μg/mL之間。

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