微生物群體分離純化技術

[db:作者] / 2022-11-28 00:00

從混雜的微生物群體中獲得單一菌株的方法稱為分離純化。分離純化可采用瓊脂平板劃線分離法、傾注平板法、平板表面涂布法等。需要注意的是，一次分離純化操作得到的單菌落并不一定保證是單一菌株，因此，單一菌株的確定除觀察其菌落特征外，還要結合顯微鏡觀察個體形態特征后才能確定，有些微生物要經過多次分離純化過程才能得到單一菌株。

(一)瓊脂平板劃線分離法

平板劃線有多種方法，其目的都是要將細菌分開，培養后可觀察單個菌落的特征，有斜線法、曲線法、方格法、放射法和四格法，如圖4-2所示。現主要介紹常用的分區斜線劃線法：燒灼接種環，待冷，取一接種環菌液。左手斜持平皿，靠近火焰周圍，右手握持沾菌的接種環伸入皿內平行劃線，劃線范圍占平板的1/3～1/5；完成第一區域的劃線后，旋轉平板，在平板另1/3～1/5面積內作連續平行劃線，如果菌液中菌體數量很多，劃完第一區域后需要灼燒接種環；如此重復3～4次，以達到培養后能獲得單個菌落的目的。

圖4-2 平板劃線法

a.斜線法b.曲線法c.方格法d.放射法e.四格法

(二)傾注平板法

本法常用于菌落總數測定、細菌對藥物的敏感度試驗以及藥物的含量測定等。傾注平板的常用操作方法有以下兩種：

1.菌液混入培養基法 用無菌吸管吸取定量菌液，加入已熔化并冷卻至約50℃的瓊脂培養基中，迅速混勻，倒入無菌平皿，使其均勻布滿皿底。平置勿動，凝固后即成含菌平板。此法細菌分布均勻，藥物的抑菌試驗(藥敏試驗)多用此法制備含菌平板。

2.菌液先加入平皿法 以無菌吸管吸取定量菌液或其他含菌樣品，加入無菌平皿中，再將熔化并冷卻至約50℃的無菌瓊脂培養基傾入該平皿中，立即將平皿輕輕地旋轉晃動，以使菌液與培養基混合均勻，平置待凝固。計算藥品、食品等樣品中菌落總數時常用此法。由于是將定量樣品直接加入平皿中，所以菌落數較準確。

(三)平板表面涂布法

由于將含菌材料加到還比較燙的培養基中再倒平板容易造成某些熱敏感菌的死亡，而且傾注平板法也會導致一些嚴格好氧菌因被固定在瓊脂中間缺乏氧氣而影響生長，這種情況下就需要采用平板表面涂布法。其做法是將一定量的某一稀釋度的樣品懸液滴加在平板表面上，再用無菌涂布棒將菌液均勻分散至整個平板表面，經培養后挑取單個菌落。

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